褪黑素及其受體激動劑對脂肪細(xì)胞胰島素抵抗相關(guān)因子影響的研究.pdf

1、目的：研究Mel及其受體激動劑Neu-P11對FFA誘導(dǎo)的3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗相關(guān)因子AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC、瘦素、脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體1的表達(dá)及葡萄糖攝取能力和甘油三酯含量的影響。
　　方法：實(shí)驗(yàn)分為三個(gè)部分，第一部分是細(xì)胞的誘導(dǎo)分化，用經(jīng)典的“雞尾酒”法即IBMX、地塞米松和胰島素三聯(lián)培養(yǎng)誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細(xì)胞分化成脂肪細(xì)胞，并用油紅O染色鑒定脂肪細(xì)胞形態(tài)。第二部分是利用FFA誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞的胰島

2、素抵抗，葡萄糖氧化酶法檢測細(xì)胞攝取葡萄糖的能力。第三部分是檢測Mel及其受體激動劑NEU-P11對FFA處理的3T3-L1脂肪細(xì)胞的葡萄糖攝取能力及其相關(guān)蛋白瘦素、脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體1、AMPK、P-AMPK、ACC、P-ACC表達(dá)的影響，并采用甘油三酯試劑盒檢測甘油三酯的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：用“雞尾酒”法誘導(dǎo)3T3-L1成纖維細(xì)胞10～12天以后，90％分化為成熟的脂肪細(xì)胞，油紅O染色可見圓形、脂滴很多呈典型的“戒環(huán)樣”形態(tài)。

3、用棕櫚酸誘導(dǎo)脂肪細(xì)胞發(fā)生胰島素抵抗，結(jié)果顯示：300uM的棕櫚酸處理12小時(shí)后，細(xì)胞攝取葡萄糖的能力明顯降低，細(xì)胞內(nèi)甘油三酯的含量增加，脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體1、瘦素、AMPK及磷酸化AMPK、ACC及磷酸化ACC的表達(dá)水平下降，Mel/Neu-P11于FFA處理結(jié)束前6小時(shí)加入一起孵育，結(jié)果顯示：細(xì)胞攝取葡萄糖的能力隨著胰島素濃度的增加而顯著增加，甘油三酯的含量則隨著Mel/Neu-P11的干預(yù)處理而降低，接近正常水平，同時(shí)我們還發(fā)現(xiàn)：脂

4、聯(lián)素及脂聯(lián)素受體1、AMPK及磷酸化 AMPK、ACC及磷酸化 ACC的表達(dá)水平隨著Mel/Neu-P11的干預(yù)處理呈現(xiàn)上調(diào)的趨勢，接近正常水平，瘦素在 Mel/Neu-P11干預(yù)處理6小時(shí)后變化不明顯，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1.Mel/Neu-P11可以增加棕櫚酸處理的脂肪細(xì)胞在胰島素刺激下的葡萄糖攝取能力；2. Mel/Neu-P11能夠上調(diào)棕櫚酸處理的脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素及脂聯(lián)素受體1的表達(dá)，進(jìn)一步激活A(yù)MPK，導(dǎo)致其下游蛋白