半夏鎮(zhèn)痛活性篩選、基于UPLC-MS-MS技術(shù)的藤茶化學(xué)成分分析.pdf

1、半夏為天南星科半夏Pinellia ternata(Thunb.)Breit.的干燥塊莖，俗名有地文、水玉、野芋頭、天落星和狗芋頭等。主產(chǎn)于我國(guó)貴州、四川、湖北等地。《中國(guó)藥典》（2010版）記載半夏具燥濕化痰，降逆止嘔，消痞 散結(jié)之功效。半夏臨床運(yùn)用已達(dá)兩千多年，常配伍中藥方劑，如小半夏湯、半夏瀉心湯,臨床上主要用于祛痰止嘔等，而我國(guó)部分地區(qū)民間有將半夏單用或與其他藥組成復(fù)方用于鎮(zhèn)痛的習(xí)慣。關(guān)于半夏的化學(xué)和藥理研究報(bào)道甚多，但主要集中

2、在祛痰止嘔等方面，而對(duì)其鎮(zhèn)痛活性成分及藥理的研究甚少。為探明半夏的鎮(zhèn)痛活性成分，本文采用扭體法和熱板法藥理模型，篩選出半夏鎮(zhèn)痛活性部位，并對(duì)活性部位進(jìn)行了成分分析。
　　藤茶，俗名田婆茶、山甜茶、甘露茶等，為野生葡萄科蛇葡萄屬植物嫩莖葉，學(xué)名顯齒蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata W.T.Wang），主要分布在廣西、湖南、福建、云南等地區(qū)。作為藥食兩用佳品，藤茶民間應(yīng)用歷史悠久，有“神茶”之美譽(yù)。藤茶具有廣泛

3、的藥理活性，其降血糖、抗氧化、降血脂、解酒功效已得到藥理證實(shí)。藤茶化學(xué)成分豐富，二氫楊梅素和楊梅素是其代表性成分，本實(shí)驗(yàn)室已分離純化獲得并做了相關(guān)活性研究。為了全面了解分析藤茶化學(xué)成分，本文采用UPLC-MS-MS技術(shù)，利用TOF-MS高靈敏度、快速高效的特點(diǎn)，根據(jù)分子離子峰以及二級(jí)質(zhì)譜碎片信息，對(duì)比標(biāo)準(zhǔn)品信息和參考相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)藤茶化學(xué)成分進(jìn)行快速、準(zhǔn)確的鑒定，并對(duì)部分黃酮類的ESI質(zhì)譜裂解規(guī)律進(jìn)行探討。
　　主要研究?jī)?nèi)容：

4、>　　1.鎮(zhèn)痛藥效學(xué)篩選:為探究半夏鎮(zhèn)痛活性部位，本文采用扭體法、熱板法對(duì)半夏不同極性部位進(jìn)行初步篩選，結(jié)果表明，石油醚部位和氯仿鎮(zhèn)痛效果較好。結(jié)合初步篩選結(jié)果以及文獻(xiàn)，對(duì)有機(jī)酸部位、生物堿部位進(jìn)行二次篩選考察，結(jié)果表明有機(jī)酸部位鎮(zhèn)痛藥效顯著，具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.響應(yīng)曲面法優(yōu)化半夏總有機(jī)酸提取工藝：在單因素結(jié)果基礎(chǔ)上，選取因素和水平，采用Box-Behnken模型，利用Design Expert8.0軟件對(duì)17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)進(jìn)行數(shù)據(jù)

5、分析，考察料液比、乙醇濃度、提取時(shí)間對(duì)半夏總有機(jī)酸提取率的影響，最終確定總有機(jī)酸最佳提取工藝條件為:料液比1:20.4，乙醇濃度69.34％，提取時(shí)間109.2min。
　　3.石油醚部位和有機(jī)酸部位的化學(xué)成分分析:本文對(duì)鎮(zhèn)痛有效的石油醚部位進(jìn)行GC-MS分析，經(jīng)計(jì)算機(jī)檢索，對(duì)照NIST2005譜庫(kù)，確認(rèn)37個(gè)化合物，烷烴類、脂肪酸、高級(jí)脂肪酸酯類、甾醇類是石油醚部位主要成分，占總含量的68.03%。對(duì)有機(jī)酸部位分別采用薄層色譜和

6、GC-MS分析，確定3個(gè)小分子有機(jī)酸化合物以及4個(gè)脂肪酸。
　　4.藤茶化學(xué)成分UPLC-TOF/MS分析:采用Agilent Eclipse Plus C18Column(2.1mm×100mm,1.8μm)色譜柱，以0.1%甲酸水-乙腈為流動(dòng)相，梯度洗脫，流速0.3mL·min?1，進(jìn)樣量5μL，柱溫25℃。采用ESI源，負(fù)離子模式，質(zhì)量掃描范圍100-1200，根據(jù)精確分子量、保留時(shí)間以及二級(jí)質(zhì)譜圖，并與對(duì)照品或文獻(xiàn)對(duì)比，明