協(xié)同刺激分子OX40L在2型糖尿病合并大血管病變中的作用及意義.pdf

1、隨著人民生活水平的提高，生活方式西方化及人口老齡化，人類健康面臨的慢性疾病威脅正日益加重，其中糖尿病及其慢性并發(fā)癥更是危害健康的無(wú)情殺手。近年來(lái)研究認(rèn)為，2型糖尿病（T2DM）是一種免疫相關(guān)性慢性炎癥性疾病，機(jī)體免疫調(diào)節(jié)異?？赡茉赥2DM及其并發(fā)癥的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。協(xié)調(diào)刺激分子OX40L是腫瘤壞死因子超家族（TNFSF）成員，與其特異性受體OX40相結(jié)合，式為T、B細(xì)胞的長(zhǎng)效激活提供第二信號(hào)[1]，發(fā)揮重要的免疫調(diào)節(jié)作

2、用。
　　本課題通過(guò)流細(xì)胞技術(shù)以及 ELISA法檢測(cè)單純糖尿病患者、糖尿病合并頸動(dòng)脈斑塊患者和糖尿病合并急性心肌梗死患者外周血中單核細(xì)胞表面OX40L和可溶性O(shè)X40L（sOX40L）的水平變化，分析膜型和可溶性O(shè)X40L在糖尿病大血管病變發(fā)生發(fā)展中的生物學(xué)作用。
　　一、O X40/O X40 L信號(hào)通路在2型糖尿病合并大血管病變中的表達(dá)及意義
　　目的:探討2型糖尿病及其合并大血管病變患者外周血免疫細(xì)胞表面OX40

3、/OX40L和血清中可溶性O(shè)X40L(sOX40L)的表達(dá)變化。
　　方法:采用免疫熒光標(biāo)記流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)A組（單純2型糖尿病組，42例）、B組（2型糖尿病合并頸動(dòng)脈斑塊組，31例）、C組（2型糖尿病合并急性心肌梗死組，25例）、D組（健康對(duì)照組，33例）人群外周血免疫細(xì)胞膜表面OX40和OX40L的表達(dá)水平，ELISA法檢測(cè)四組血清sOX40L的濃度。
　　結(jié)果:四組人群中，外周血CD4+、CD8+ T淋巴細(xì)胞表面OX4

4、0的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與D組比較，A、B、C三組CD14+單核細(xì)胞表面OX40L的表達(dá)均上調(diào)(P<0.01)；C組 CD14+單核細(xì)胞表面 OX40L表達(dá)水平高于 A組、B組（P<0.01、P<0.05）。與D組相比，A、B、C組患者血清sOX40L的水平明顯升高(P<0.01)，C組患者血清sOX40L的表達(dá)水平高于A組、B組（P<0.01、P<0.05）。
　　結(jié)論:2型糖尿病患者外周血單核細(xì)胞表面及血清

5、中上調(diào)表達(dá)OX40L，其表達(dá)水平與糖尿病大血管病變嚴(yán)重程度密切相關(guān)。
　　二、高糖對(duì)單核細(xì)胞表面OX40L以及可溶性O(shè)X40L表達(dá)的影響及生物學(xué)意義
　　目的:探討高糖對(duì)單核細(xì)胞表面OX40L分子表達(dá)和培養(yǎng)上清中可溶性O(shè)X40L產(chǎn)生的影響，觀察高糖對(duì)單核細(xì)胞生物學(xué)作用的影響。
　　方法:(1)收取健康人外周血，淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll）分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），貼壁1~2h后，移除懸浮細(xì)胞，收集貼壁細(xì)胞

6、即為CD14+單核細(xì)胞（純度可達(dá)90％左右）；(2)實(shí)驗(yàn)分組均以不同濃度葡萄糖(5.5、11、22、33mmol/L)加入培養(yǎng)基中干預(yù)CD14+單核細(xì)胞，分別于12h、24h、36h、48h收細(xì)胞和培養(yǎng)上清；(3)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD14+單核細(xì)胞表面OX40L的表達(dá)；(4)應(yīng)用ELISA試劑盒檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中sOX40L和TNF-α的含量。
　　結(jié)果:
　　(1)流式結(jié)果顯示：高糖濃度組單核細(xì)胞表面OX40L表達(dá)較對(duì)照