聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1對(duì)大鼠極限肝切除術(shù)后急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　 探討聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1對(duì)大鼠極限肝切除術(shù)后急性肝損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制的研究。
　　 材料和方法
　　 采用大鼠90％肝切除動(dòng)物模型，將64只大鼠隨機(jī)分為4組，用于肝大部切除術(shù)后肝功能損害的研究:單純肝大部切除術(shù)組，即對(duì)照組（Control Group，C組）16只，生長(zhǎng)抑素治療組(Somatostatin Group，S組)16只，前列腺素E1治療組（Prostaglandin E1

2、Group，P組）16只和聯(lián)合用藥治療組（Mixed Group， M組）16只。四組大鼠均分別在肝切除術(shù)后10分鐘、6小時(shí)、12小時(shí)和24小時(shí)這4個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行觀察，共分為16個(gè)亞組，分別為:C0、C6、C12、C24，S0、S6、S12、S24，P0、P6、P12、P24，M0、M6、M12、M24。每個(gè)亞組4只大鼠，于各時(shí)點(diǎn)進(jìn)行標(biāo)本采集。血清標(biāo)本進(jìn)行丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、總

3、膽紅素(TB)、白蛋白(ALB)測(cè)定。檢測(cè)相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)的門(mén)靜脈壓力值。檢測(cè)肝組織濕重并計(jì)算肝重體重比。肝組織HE染色觀察光鏡下形態(tài)學(xué)改變，并用TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡指數(shù)。血清標(biāo)本用于檢測(cè)細(xì)胞因子(TNF-α、IL-6)以及抗氧化酶(SOD、GSH)的水平。肝組織冷凍標(biāo)本用于檢測(cè)細(xì)胞因子（TNF-α、IL-6）、抗氧化酶(SOD、GSH)、凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2、Bax、Caspase3、HSP70)以及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白(CGR

4、P78、PERK、ATF6、CHOP)的表達(dá)。另外選取40只大鼠隨機(jī)分為相應(yīng)的4組，觀察術(shù)后生存時(shí)間，進(jìn)行術(shù)后生存時(shí)間的統(tǒng)計(jì)和分析。
　　 結(jié)果：
　　 1、肝功能檢測(cè):肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）血清ALT、AST、ALP和TB水平與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較均明顯下調(diào)(P＜0.05)，而血清ALB水平各組間無(wú)顯著性差異。
　　 2、肝重體重比測(cè)定:肝切除術(shù)后24h，聯(lián)合用藥組（M組）肝重

5、體重比與單純肝切除對(duì)照組（C組）和生長(zhǎng)抑素組（S組）比較略有增加(P＜0.05，P＜0.05)。
　　 3、光鏡下病理組織形態(tài)學(xué)檢查:藥物處理組（S組、P組和M組）與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較，肝細(xì)胞腫脹變性壞死及空泡樣變性、肝小葉結(jié)構(gòu)排列紊亂、匯管區(qū)炎癥等肝細(xì)胞損害程度均有所減輕，其中以聯(lián)合用藥組（M組）減輕最明顯。
　　 4、生存時(shí)間分析:生長(zhǎng)抑素組（S組）和前列腺素E1組（P組）生存時(shí)間較單純肝切除對(duì)照組（C組）

6、延長(zhǎng)(P＜0.05)，而聯(lián)合用藥組（M組）生存時(shí)間較C組明顯延長(zhǎng)(P＜0.001)。
　　 5、門(mén)靜脈壓力值測(cè)定:肝切除術(shù)后10min和6h，藥物處理組（S組、P組和M組）門(mén)靜脈壓力值與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較均明顯下調(diào)(P＜0.01);肝切除術(shù)后12h，生長(zhǎng)抑素組（S組）和聯(lián)合用藥組（M組）門(mén)靜脈壓力值與C組比較均明顯下調(diào)(P＜0.05);肝切除術(shù)后24h，C組門(mén)靜脈壓力值仍然高于基礎(chǔ)門(mén)靜脈壓力值，但S組、P組和M組門(mén)靜脈

7、壓力值與基礎(chǔ)門(mén)靜脈壓力值比較均已無(wú)顯著性差異。
　　 6、血清和肝組織腫瘤壞死因子--α(TNF-α)和白細(xì)胞介素-6(IL-6)水平:
　　 (1)血清ELISA法檢測(cè):肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min、6h及12h比較，各組血清TNF-α水平均明顯升高。肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）血清TNF-α水平與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較均明顯下調(diào)(P＜0.001)，并且前列腺素E1組（P組）和聯(lián)合用藥組（

8、M組）血清TNF-α水平分別低于生長(zhǎng)抑素組（S組）(P＜0.001，P＜0.01)。肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min、6h及12h比較，各組血清IL-6水平均明顯升高。肝切除術(shù)后24h，S組、P組和M組血清IL-6水平與C組比較均明顯下調(diào)(P＜0.001)。(2)肝組織Western blot法檢測(cè):肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min比較，C組肝組織TNF-α水平明顯升高。肝切除術(shù)后24h，S組、P組和M組肝組織TNF-α水平與C組比較均

9、明顯下調(diào)，其中M組肝組織TNF-α水平又低于S組和p組(P＜0.01，P＜0.01)。肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min比較，C組肝組織IL-6水平亦明顯升高。肝切除術(shù)后24h，S組、P組和M組肝組織IL-6水平與C組比較均明顯下調(diào)(P＜0.01)，其中M組肝組織IL-6水平又低于S組和P組(P＜0.01，P＜0.01)。
　　 7、血清和肝組織抗氧化酶SOD、GSH水平:隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)，各組血清和肝組織SOD和GSH的水平逐

10、漸升高恢復(fù);與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較，藥物處理組（S組、P組、M組）可明顯升高血清和肝組織SOD和GSH的水平(P＜0.05)。
　　 8、TUNEL法檢測(cè)肝細(xì)胞凋亡指數(shù):隨著術(shù)后時(shí)間的延長(zhǎng)，各組肝細(xì)胞凋亡指數(shù)（Apoptotic Index，AI）逐漸升高。肝切除術(shù)后12h，藥物處理組（S組、P組和M組）AI值與單純肝切除對(duì)照組（C組）比較均明顯下調(diào)(P＜0.05)。肝切除術(shù)后24h，藥物處理組(S組、P組和M組)AI值

11、與C組比較均明顯下調(diào)(P＜0.001);與生長(zhǎng)抑素組（S組）和前列腺素E1組（P組）比較，聯(lián)合用藥組（M組）AI值明顯下調(diào)(P＜0.001，P＜0.05)。
　　 9、Western blot法檢測(cè)Bcl-2、Bax、Caspase3和HSP70蛋白表達(dá)水平:肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min比較，單純肝切除對(duì)照組（C組）Bcl-2和HSP70蛋白表達(dá)水平明顯降低。肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）Bcl-2和HSP

12、70蛋白表達(dá)水平與C組比較均上調(diào)(P＜0.01)，其中以聯(lián)合用藥組（M組）上調(diào)最明顯(P＜0.01)。肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min比較，C組Bax和Caspase3蛋白表達(dá)水平明顯升高;而肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）Bax和Caspase3蛋白表達(dá)水平與C組比較均下調(diào)(P＜0.01)，其中以M組下調(diào)最明顯(P＜0.01)。
　　 10、Western blot法檢測(cè)GRP78、PERK、ATF6和CHOP

13、蛋白表達(dá)水平:肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10min比較，單純肝切除對(duì)照組（C組）GRP78蛋白表達(dá)水平明顯降低;而肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）GRP78蛋白表達(dá)水平與C組比較表達(dá)上調(diào)(P＜0.01)，其中以聯(lián)合用藥組（M組）上調(diào)最明顯(P＜0.01)。肝切除術(shù)后24h與術(shù)后10rmin比較，C組PERK、ATF6和CHOP蛋白表達(dá)水平均明顯升高;而肝切除術(shù)后24h，藥物處理組（S組、P組和M組）PERK、ATF6和CHO

14、P蛋白表達(dá)水平與C組比較均下調(diào)(P＜0.01)，其中以M組下調(diào)最明顯(P＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1、聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1對(duì)大鼠極限肝切除術(shù)后急性肝損傷具有明顯的保護(hù)作用，且對(duì)肝切除術(shù)后早期的肝再生有一定的促進(jìn)作用。
　　 2、聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1能有效延長(zhǎng)大鼠極限肝切除術(shù)后的生存時(shí)間，改善預(yù)后。
　　 3、聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1可以減輕大鼠極限肝切除術(shù)后早期肝損傷的

15、程度，其作用機(jī)制可能是通過(guò)降低肝切除術(shù)后過(guò)高的門(mén)靜脈壓力，降低TNF-α、IL-6等炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，增強(qiáng)SOD、GSH等抗氧化物的表達(dá)，有效抑制過(guò)度炎癥反應(yīng)，從而減輕對(duì)殘肝組織的損傷，保護(hù)肝功能。
　　 4、聯(lián)合應(yīng)用生長(zhǎng)抑素和前列腺素E1可以減輕大鼠極限肝切除術(shù)后早期出現(xiàn)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激狀態(tài)，上調(diào)GRP78、HSP70和Bcl-2的表達(dá)，抑制PERK、ATF6、CHOP、Bax和Caspase3的表達(dá)，減輕繼發(fā)的肝細(xì)胞凋亡，緩解