還原-pH雙重響應的PAMAM納米粒聯(lián)合攜載阿霉素與乳腺癌MDR逆轉劑依克立達的研究.pdf

1、目的：基于聚酰胺-胺樹狀大分子（PAMAM），制備還原、pH雙重敏感的納米載體PSSP，用于聯(lián)合攜載化療藥物阿霉素（DOX）及耐藥逆轉劑依克立達（ELC），同時對其逆轉乳腺癌多藥耐藥的效果進行體內外評價。
　　方法：采用氫譜（1H NMR）、紅外光譜（FTIR）對載體PSSP進行結構表征。利用疏水作用同時負載DOX和ELC制備聯(lián)載藥納米粒PSSP/DOX/ELC，并對其進行粒徑、電位、包封率和載藥量的表征。通過透析袋法考察納米粒的

2、體外釋放行為。以MCF-7（對DOX敏感）和MCF-7/ADR（對DOX不敏感）的人乳腺癌細胞為主要的模型細胞，通過 MTT法分別測定空白載體、游離 ELC、PSSP/DOX和PSSP/DOX/ELC納米粒的細胞毒性，計算相應的IC50、耐藥倍數和逆轉因子。通過激光共聚焦（CLSM）、流式細胞儀和酸化異丙醇萃取法對載藥納米粒的攝取情況進行定性及定量分析。選取代表性的抑制劑考察細胞攝取機制，并通過還原、酸抑制劑考察納米粒在細胞內的釋藥情況

3、。以P-gp的自然底物羅丹明123為模型藥，利用流式細胞術考察ELC在細胞內的起效濃度以及對藥物外排的抑制效果。利用ATP檢測試劑盒及流式細胞術進一步考察ELC的作用機制。載藥納米粒的體內抗腫瘤實驗在MCF-7荷瘤裸鼠的體內進行的，并采用HE染色的方法考察腫瘤和主要器官的病理變化。
　　結果：HNMR和FTIR結果顯示，載體PSSP成功合成。制備的不同DOX:ELC摩爾比的納米粒粒徑在10~20 nm之間，Zeta電位在+2~5m

4、V之間。所制備的納米粒具有較高的包封率，同時負載兩藥時DOX載藥量在10％左右，ELC也可達到2%左右。PSSP/DOX/ELC納米粒中兩藥體外同時釋放呈現(xiàn)明顯的還原、pH敏感性。空白載體和游離ELC無明顯的細胞毒性。與PSSP/DOX相比，PSSP/DOX/ELC聯(lián)載納米粒表現(xiàn)出較強的細胞毒性和多藥耐藥的逆轉效果，細胞攝取實驗結果同樣表明PSSP/DOX/ELC的攝取顯著高于PSSP/DOX，由此證明DOX與ELC聯(lián)用增加DOX的抗腫

5、瘤活性。納米粒主要通過網格蛋白介導的途徑進入細胞，在細胞中利用溶酶體的酸環(huán)境和胞質的高還原環(huán)境釋藥。ELC可在低濃度條件下抑制P-gp對DOX的外排，增加胞內含量，另一方面可能間接性引起胞內ATP水平的升高，從而增加能量依賴性的載體攝取，進一步提高DOX的入胞量。體內抑瘤實驗表明PSSP/DOX/ELC納米粒通過不同的給藥策略均能明顯抑制腫瘤生長，同時HE染色結果顯示PSSP/DOX/ELC可顯著降低DOX的毒副作用，此外PSSP/DO

6、X/ELC還可有效遏制腫瘤耐藥轉變前期的藥物外排應激反應，降低腫瘤治療的難度。
　　結論：基于PAMAM成功制備了具有還原、pH雙敏感性的DOX和ELC聯(lián)載納米粒。所制備的納米粒粒徑均一，具有較高的包封率、載藥量，體外釋放呈現(xiàn)良好的還原、pH雙重敏感性。體內外抗腫瘤活性實驗結果顯示，聯(lián)載納米粒可有效逆轉乳腺癌多藥耐藥，增強DOX對腫瘤細胞的毒性，同時有效遏制一般腫瘤化療初期由耐藥轉變引起的藥物外排應激反應，降低腫瘤治療的難度，減少