還原-pH雙重響應(yīng)的PAMAM納米粒聯(lián)合攜載阿霉素與乳腺癌MDR逆轉(zhuǎn)劑依克立達(dá)的研究.pdf

1、目的：基于聚酰胺-胺樹(shù)狀大分子（PAMAM），制備還原、pH雙重敏感的納米載體PSSP，用于聯(lián)合攜載化療藥物阿霉素（DOX）及耐藥逆轉(zhuǎn)劑依克立達(dá)（ELC），同時(shí)對(duì)其逆轉(zhuǎn)乳腺癌多藥耐藥的效果進(jìn)行體內(nèi)外評(píng)價(jià)。
　　方法：采用氫譜（1H NMR）、紅外光譜（FTIR）對(duì)載體PSSP進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征。利用疏水作用同時(shí)負(fù)載DOX和ELC制備聯(lián)載藥納米粒PSSP/DOX/ELC，并對(duì)其進(jìn)行粒徑、電位、包封率和載藥量的表征。通過(guò)透析袋法考察納米粒的

2、體外釋放行為。以MCF-7（對(duì)DOX敏感）和MCF-7/ADR（對(duì)DOX不敏感）的人乳腺癌細(xì)胞為主要的模型細(xì)胞，通過(guò) MTT法分別測(cè)定空白載體、游離 ELC、PSSP/DOX和PSSP/DOX/ELC納米粒的細(xì)胞毒性，計(jì)算相應(yīng)的IC50、耐藥倍數(shù)和逆轉(zhuǎn)因子。通過(guò)激光共聚焦（CLSM）、流式細(xì)胞儀和酸化異丙醇萃取法對(duì)載藥納米粒的攝取情況進(jìn)行定性及定量分析。選取代表性的抑制劑考察細(xì)胞攝取機(jī)制，并通過(guò)還原、酸抑制劑考察納米粒在細(xì)胞內(nèi)的釋藥情況

3、。以P-gp的自然底物羅丹明123為模型藥，利用流式細(xì)胞術(shù)考察ELC在細(xì)胞內(nèi)的起效濃度以及對(duì)藥物外排的抑制效果。利用ATP檢測(cè)試劑盒及流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)一步考察ELC的作用機(jī)制。載藥納米粒的體內(nèi)抗腫瘤實(shí)驗(yàn)在MCF-7荷瘤裸鼠的體內(nèi)進(jìn)行的，并采用HE染色的方法考察腫瘤和主要器官的病理變化。
　　結(jié)果：HNMR和FTIR結(jié)果顯示，載體PSSP成功合成。制備的不同DOX:ELC摩爾比的納米粒粒徑在10~20 nm之間，Zeta電位在+2~5m

4、V之間。所制備的納米粒具有較高的包封率，同時(shí)負(fù)載兩藥時(shí)DOX載藥量在10％左右，ELC也可達(dá)到2%左右。PSSP/DOX/ELC納米粒中兩藥體外同時(shí)釋放呈現(xiàn)明顯的還原、pH敏感性?？瞻纵d體和游離ELC無(wú)明顯的細(xì)胞毒性。與PSSP/DOX相比，PSSP/DOX/ELC聯(lián)載納米粒表現(xiàn)出較強(qiáng)的細(xì)胞毒性和多藥耐藥的逆轉(zhuǎn)效果，細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果同樣表明PSSP/DOX/ELC的攝取顯著高于PSSP/DOX，由此證明DOX與ELC聯(lián)用增加DOX的抗腫

5、瘤活性。納米粒主要通過(guò)網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的途徑進(jìn)入細(xì)胞，在細(xì)胞中利用溶酶體的酸環(huán)境和胞質(zhì)的高還原環(huán)境釋藥。ELC可在低濃度條件下抑制P-gp對(duì)DOX的外排，增加胞內(nèi)含量，另一方面可能間接性引起胞內(nèi)ATP水平的升高，從而增加能量依賴(lài)性的載體攝取，進(jìn)一步提高DOX的入胞量。體內(nèi)抑瘤實(shí)驗(yàn)表明PSSP/DOX/ELC納米粒通過(guò)不同的給藥策略均能明顯抑制腫瘤生長(zhǎng)，同時(shí)HE染色結(jié)果顯示PSSP/DOX/ELC可顯著降低DOX的毒副作用，此外PSSP/DO

6、X/ELC還可有效遏制腫瘤耐藥轉(zhuǎn)變前期的藥物外排應(yīng)激反應(yīng)，降低腫瘤治療的難度。
　　結(jié)論：基于PAMAM成功制備了具有還原、pH雙敏感性的DOX和ELC聯(lián)載納米粒。所制備的納米粒粒徑均一，具有較高的包封率、載藥量，體外釋放呈現(xiàn)良好的還原、pH雙重敏感性。體內(nèi)外抗腫瘤活性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，聯(lián)載納米?？捎行孓D(zhuǎn)乳腺癌多藥耐藥，增強(qiáng)DOX對(duì)腫瘤細(xì)胞的毒性，同時(shí)有效遏制一般腫瘤化療初期由耐藥轉(zhuǎn)變引起的藥物外排應(yīng)激反應(yīng)，降低腫瘤治療的難度，減少