豬抵抗素、脂聯(lián)素和脂聯(lián)素受體基因的克隆和分子特征.pdf

1、脂肪組織不僅是儲藏及供給能量的場所，而且還是一個代謝十分活躍，功能復雜的內分泌器官，它能分泌許多脂肪細胞因子，包括腫瘤壞死因子-α(TNFα),瘦素(leptin)、白介素—6(IL-6)、脂聯(lián)素和抵抗素等。這些脂肪細胞因子通過內分泌或旁分泌方式對全身各器官系統(tǒng)功能具有重要調節(jié)作用，特別是參與調節(jié)與肥胖相關的胰島素抵抗和葡萄糖代謝紊亂。胰島素抵抗也即胰島素生理作用減弱，是多數(shù)2型糖尿病的主要的病理生理缺陷，往往與肥胖密切相關。

2、 抵抗素和脂聯(lián)素是近來發(fā)現(xiàn)的兩個最為典型的脂肪細胞因子。Resistin的重要生理作用就是將肥胖與胰島素抵抗聯(lián)系起來。對resistin進一步深入研究對于預防、檢測和治療2型糖尿病具有重要指導意義。Adiponectin由脂肪細胞分泌后進入血液，以多種形式在血液中循環(huán)。脂聯(lián)素球狀區(qū)在體內獨立存在，與完整的脂聯(lián)素功能相似。脂聯(lián)素能夠促進肌肉脂肪酸氧化、降低血漿甘油三酯、通過增強胰島素的敏感性而促進葡萄糖代謝。另外，脂聯(lián)素在抗心血管疾病方面

3、也發(fā)揮著重要作用。 本文以梅山豬為研究對象，以半定量RT-PCR、Western Bloting和輻射雜種細胞板技術等方法，對抵抗素、脂聯(lián)素以及脂聯(lián)素受體進行了基因克隆、表達及染色體定位等研究，取得了如下結果： 1.利用cDNA末端快速擴增(RACE)的方法得到了豬resistin cDNA的5'和3'末端，通過拼接得到全長535bp的resistin cDNA序列；利用PCR的方法得到了resistin的全長DNA

4、序列，并對其基因組結構進行分析。結果顯示豬resistin cDNA序列含330bp的開放閱讀框，編碼109aa，分子量為12kDa，推導的氨基酸序列與人resistin氨基酸序列具有75.2％的同源性。豬resistin基因由四個外顯子組成，與人resistin基因具有相同的外顯子結構，而與小鼠resistin基因結構差異較大。 2.以豬的心、肝、脾、血液白細胞、肺等十二個組織樣品作為研究材料，利用半定量RT-PCR的方法研

5、究了豬resistin基因在各組織的表達譜和表達規(guī)律，結果表明該基因在所有被檢測的樣品中均有表達，但在血液白細胞中表達量最高，這與人resistin的研究結果一致，而與嚙齒動物resistin的結果完全不同(主要在白色脂肪組織中特異表達)。這表明豬resistin具有與人resistin相似的表達規(guī)律和功能。 3.制備了兔抗豬resistin多克隆抗血清，并利用該抗血清檢測了豬resistin蛋白質在血液中的表達情況，west

6、ern blotting結果表明豬resistin在血液中以二聚體和三聚體的形式循環(huán)，表明豬resistin可能主要以這兩種形式發(fā)揮功能。 4.依據(jù)NCBI已公布的豬脂聯(lián)素、部分脂聯(lián)素受體1和2的mRNA序列，以及人的這三個基因的mRNA和基因組序列，設計引物得到了豬脂聯(lián)素的第二個內含子，脂聯(lián)素受體1的第5個內含子、脂聯(lián)素受體2的第5個內含子以及脂聯(lián)素受體1基因的部分基因組序列。 5.根據(jù)獲得的豬脂聯(lián)素、部分脂聯(lián)素受

7、體1和2的基因片段序列設計引物，利用輻射雜種板技術對這三個基因進行了染色體精細定位。結果顯示這三個基因分別定位于13、10和5號染色體上，分別與人的這三個基因處于保守向線群。 6.以豬的心、肝、脾、血液白細胞、肺等十二個組織樣品作為研究材料，利用半定量RT-PCR的方法研究了豬脂聯(lián)素、脂聯(lián)素受體1和2基因的組織表達，結果表明豬脂聯(lián)素在脂肪組織中特異高效表達；脂聯(lián)素受體1和2除了腦組織以外，在其他所有被檢測的組織中均有表達，但脂