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文檔簡介
1、生長素(Ghrelin)是由胃腸道分泌的一種多肽,最初發(fā)現(xiàn)其具有促進(jìn)生長激素分泌的作用。隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)它還有促進(jìn)食欲、促進(jìn)胃酸的分泌、也可能參與多種脂肪細(xì)胞因子相互作用,參與能量代謝等其他生物學(xué)作用,并可能參與肥胖的發(fā)病過程。脂聯(lián)素(AdipoQ)具有降低血脂,降低血糖,改善胰島素敏感性的作用,同時(shí)可拮抗動(dòng)脈粥樣硬化的形成。由于這些優(yōu)點(diǎn),adipoQ或刺激adipoQ分泌的藥物可用于治療與胰島素抵抗有關(guān)的疾病和心血管疾病。本研究克
2、隆了ghrelin基因和adipoQ基因的編碼序列,為今后探討廣西巴馬小型豬矮小體型的遺傳機(jī)制提供分子水平上的理論依據(jù);并利用PCR-SSCP技術(shù)研究了ghrelin基因和adipoQ基因的多態(tài)性,為尋找導(dǎo)致不同品種豬生長發(fā)育的遺傳標(biāo)記做必要的基礎(chǔ)性研究。 本研究參照NCBI中GenBank發(fā)表的豬ghrelin和adipoQ基因的編碼序列,設(shè)計(jì)特異性引物,分別以廣西巴馬小型豬胃底組織和脂肪組織總RNA以及基因組DNA為模板,通
3、過反向聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)和引物懸掛延伸PCR法擴(kuò)增出相應(yīng)基因的cDNA片段??寺y序結(jié)果表明:擴(kuò)增得到的ghrelin基因cDNA序列為357bp,adipoQ基因cDNA序列為732bp,都包含了完整的編碼序列;同源性比較發(fā)現(xiàn),廣西巴馬小型豬ghrelin與GenBank中報(bào)道的豬ghrelin基因序列的同源性達(dá)到99.7%,與人類、家鼠及奶牛等物種的同源性分別為85.3%、81.4%、82.1%;廣西巴馬小型豬adipo
4、Q與GenBank中報(bào)道的豬adipoQ基因序列的同源性達(dá)到99.7%,與人類、家鼠及奶牛等物種的同源性分別為86.6%、79.1%、84.5%。以上說明克隆得到了正確的廣西巴馬小型豬ghrelin和adipoQ基因的編碼序列。測序比對發(fā)現(xiàn)ghrelin基因僅在編碼序列的第335位(C→A)發(fā)生堿基錯(cuò)義突變,使編碼氨基酸從蘇氨酸變?yōu)樘於0?;adipoQ有2處堿基發(fā)生錯(cuò)義突變:其中第91位從C→T,使編碼氨基酸從脯氨酸變?yōu)榻z氨酸;第17
5、8位從G→A,使編碼氨基酸從纈氨酸變?yōu)楫惲涟彼帷?本研究利用PCR-SSCP技術(shù)檢測5個(gè)品種豬ghrelin基因的外顯子3及adipoQ基因的2個(gè)外顯子和內(nèi)含子2的多態(tài)性。結(jié)果顯示: (1)在ghrelin基因外顯子3檢測到3種基因型,分別為AA,AB和BB,其中陸川豬只有B等位基因;廣西巴馬小型豬只有A等位基因;而在杜洛克豬,長白豬,大約克豬等引進(jìn)品種豬中,均檢測到A、B基因,以等位基因B為優(yōu)勢基因,基因頻率分別為0.
6、633、0.575、0.667。多態(tài)信息含量大小依次為長白豬、杜洛克豬、大約克豬,均為中度多態(tài);而陸川豬和廣西巴馬小型豬無多態(tài)。杜洛克豬和大約克豬x2值分別為3.9278(P>0.05)和0.0650(P>0.05),差異顯著,說明杜洛克豬和大約克豬群體在該位點(diǎn)上處于Hardy-Weinberg平衡狀態(tài),其它三個(gè)豬群在該位點(diǎn)均偏離平衡狀態(tài)。 (2)對5個(gè)不同品種豬的adipoQ基因進(jìn)行多態(tài)性檢測,在外顯子區(qū)域未檢測到多態(tài)性,而在
7、其內(nèi)含子2檢測到AA、GG和AG三種基因型。其中,長白豬和大約克豬只有A等位基因;廣西巴馬小型豬和陸川豬均以G等位基因?yàn)閮?yōu)勢基因,基因頻率分別為0.925、0.861;而大約克豬檢測到從,AG兩種基因型,其中以A等位基因?yàn)閮?yōu)勢基因,基因頻率為0.8。多態(tài)信息含量大小依次為杜洛克豬最高,為中度多態(tài);其次為廣西巴馬小型豬和陸川豬,長白豬和大約克豬均無多態(tài)。杜洛克豬和陸川豬x2值分別為0.8098(P>0.05)和0.0769(P>0.05)
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