蘇云金桿菌伴孢晶體中20kb DNA上cry基因的鑒定和克隆.pdf

1、蘇云金芽孢桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)4.0718菌株能夠產(chǎn)生雙金字塔形和立方體形晶體,它們分別由Cry1和Cry2原毒素組成.該研究在PCR-RFLP方法的基礎(chǔ)上,對(duì)與Cry1原毒素相結(jié)合的20kb DNA上含有的晶體蛋白基因進(jìn)行了鑒定.在此基礎(chǔ)上,采用PCR方法擴(kuò)增了該DNA片段上cry1Aa和cry1Ac基因的全長編碼序列,并且對(duì)cry1Aa基因編碼序列的PCR產(chǎn)物進(jìn)行了克隆.1.Bt 4.071

2、8菌株伴孢晶體的選擇性溶解與20kb DNA的提取對(duì)Bt4.0718菌株產(chǎn)生的伴孢晶體在不同的條件下選擇性溶解,然后對(duì)不同的原毒素組分進(jìn)行SDS-PAGE和瓊脂糖凝膠電泳,發(fā)現(xiàn)Cry1和Cry2原毒素均與20kb DNA相結(jié)合.與立方體形晶體相比,雙金字塔形晶體溶解時(shí)所需的條件更溫和.2.20kb DNA上cry基因的鑒定采用cry1和cry2基因的通用引物對(duì)20kb DNA上的核酸序列進(jìn)行初步分析,結(jié)果表明該片段上含有這兩類基因,而且

3、cry1基因的拷貝數(shù)要低于cry2基因的拷貝數(shù).為了對(duì)cry基因的類型作進(jìn)一步的鑒定,該研究對(duì)該DNA片段進(jìn)行了PCR-RFLP分析.研究發(fā)現(xiàn),該片段能夠擴(kuò)增出1.6kb和1.2kb的預(yù)期產(chǎn)物,而且1.6 kb PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增量要低于1.2 kb PCR產(chǎn)物的擴(kuò)增量,這與通用引物的擴(kuò)增結(jié)果一致.3.20kb DNA上cry1Aa基因的克隆在獲得cry1Aa和cry1A c基因3'端1.6kb和5'端1.4kb PCR產(chǎn)物的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)