6-姜酚對阿爾茨海默病的神經保護作用及其機制研究.pdf

1、目的:阿爾茨海默病(AD)是一種常見的發(fā)生于老年及老年前期的神經系統(tǒng)退行性疾病，以進行性認知功能障礙、記憶損害、個性改變以及精神行為異常為主要表現，WHO已將AD列為21世紀五大重點疾病之一。目前，用于治療AD的藥物只能在一定程度上改善AD的臨床癥狀，而有效防止AD發(fā)生或者治愈AD的藥物尚未出現。我們前期的研究發(fā)現，生姜提取物對β淀粉樣蛋白(Aβ)誘導的AD模型鼠的行為功能障礙具有保護作用。而6-姜酚是從生姜中提取的酚類物質，是生姜提取

2、物中的重要活性成分。本實驗通過體外孵育的方法觀察6-姜酚對Aβ1-42聚集的影響，探討6-姜酚對Aβ1-42所致的大鼠PC12細胞損傷的保護作用及其可能的作用機制。
　　方法:(1)Aβ1-42單獨或與不同濃度的6-姜酚于37℃培養(yǎng)箱中共同孵育5d后，采用硫磺素T(ThT)熒光檢測法分析6-姜酚對Aβ1-42聚集的影響;(2)未分化的PC12細胞經神經生長因子(NGF)作用5d分化為類神經元樣細胞后，通過MTT實驗檢測不同濃度Aβ

3、1-42對PC12細胞作用24、48及72 h后的細胞存活率及觀察不同濃度6-姜酚對Aβ1-42誘導細胞凋亡的保護作用;(3)通過Hoechst33258核染色法檢測6-姜酚對Aβ1-42致PC12細胞凋亡的細胞核形態(tài)改變;(4)采用流式細胞凋亡術進一步分析6-姜酚對Aβ1-42致PC12細胞凋亡的保護作用;(5)采用DCFH-DA熒光探針法檢測6-姜酚對Aβ1-42誘導PC12細胞產生氧自由基(ROS)的影響;(6)根據測定試劑盒檢測

4、6-姜酚對Aβ1-42誘導PC12細胞產生乳酸脫氫酶(LDH)、抗氧化物歧化酶(SOD)、細胞內丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的影響;(7)采用Western Blot檢測6-姜酚對Aβ1-42誘導的PC12細胞糖原合成激酶3β(GSK-3β)、磷酸化GSK-3β(Ser9)，Akt及磷酸化Akt(Ser473)表達的影響。
　　結果:(1)6-姜酚與Aβ1-42共同孵育5d后的熒光強度均較Aβ1-42組顯著降低，提示6-姜酚

5、對Aβ1-42的聚集具有拮抗作用;(2)Aβ1-42作用于PC12細胞，細胞存活率與Aβ1-42的劑量及作用時間呈負相關，其中10μM的Aβ1-42作用48 h對PC12細胞產生較為顯著的損傷作用，因而我們以此作為AD的細胞模型，用于后續(xù)的實驗研究;(3)MTT實驗結果顯示，6-姜酚在80、120及200μM時均對Aβ1-42引起的細胞損傷具有顯著的保護作用，并且在劑量為120μM時具有最佳的作用效果;(4)Hoechst33258核染

6、色及流式細胞凋亡術實驗均提示6-姜酚在80、120及200μM時對Aβ1-42引起的細胞損傷具有顯著的保護作用;(5)Aβ1-42顯著增加細胞內ROS與MDA的含量及培養(yǎng)液中LDH的活性及NO的水平，而經6-姜酚預處理4h后ROS、MDA與NO的含量及LDH的活性均較Aβ1-42處理組顯著降低;此外，6-姜酚處理組的SOD水平顯著高于Aβ1-42處理組的;(6)PC12細胞經Aβ1-42作用48 h后，GSK-3β及Akt的磷酸化水平均