人參皂苷Rd對阿爾茨海默病模型的神經(jīng)保護(hù)作用及機制探討.pdf

1、阿爾茨海默病(Alzheimerdisease,AD)多在老年時期起病，起病隱秘，病程緩慢時間長且不可逆，是一組目前病因并不明確的腦部原發(fā)性退行性變性疾病。臨床上以學(xué)習(xí)記憶認(rèn)知能力進(jìn)行性衰退為主，常伴有一定程度的語言、精神和人格等方面的異常。而其基本病理特點表現(xiàn)為Aβ沉積形成的老年斑、磷酸化Tau蛋白沉積形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)以及大量膽堿能神經(jīng)元的丟失等。由于AD病人發(fā)病影響因素較多，病因病理機制非常復(fù)雜，故目前治療并無明顯突破，缺乏有效安

2、全的治療藥物與手段。
　　課題組人員前期已經(jīng)發(fā)現(xiàn)人參皂苷Rd能夠抑制AD模型鼠海馬內(nèi)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，抑制培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元氧化應(yīng)激損傷而保護(hù)神經(jīng)元。故本課題以此為研究基礎(chǔ)，從體內(nèi)、體外、純體外三方面觀察Rd對實驗性AD模型的神經(jīng)保護(hù)作用并對其機制作初步探討，為開發(fā)安全有效的防治AD新藥提供基礎(chǔ)研究依據(jù)。
　　研究目的：探討人參皂苷Rd對實驗性AD模型的學(xué)習(xí)記憶、病理特征的影響及對其保護(hù)機制的初步探討，為尋找防治AD藥物以及研究

3、Rd作用靶點提供一定的實驗基礎(chǔ)。
　　研究方法：（1）研究對象：急性腦損傷模型：成年清潔級SD大鼠雙側(cè)海馬CA1區(qū)立體定向微量注射Aβ1-40；慢性AD動物模型：APP轉(zhuǎn)基因小鼠；體外細(xì)胞模型：Aβ25-35干預(yù)的皮層神經(jīng)元。（2）對急性腦損傷模型大鼠和APP轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行Morris水迷宮檢測觀察Rd對AD模型動物的學(xué)習(xí)記憶行為能力的影響，Nissl染色觀察其組織形態(tài)學(xué)變化；對Aβ25-35干預(yù)的皮層神經(jīng)元進(jìn)行MTT染色觀察Rd

4、對其存活率的影響和進(jìn)行免疫熒光染色觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。（3）Westernblot方法檢測磷酸化Tau蛋白主要磷酸化位點的表達(dá)，觀察Rd對AD模型內(nèi)病理特征的影響，同時對調(diào)控磷酸化Tau蛋白的關(guān)鍵激酶和磷酸酶的表達(dá)也進(jìn)行了觀察。初步探討Rd對AD模型動物的保護(hù)作用機制。（4）體外純化學(xué)實驗進(jìn)一步排除各種體內(nèi)體外環(huán)境的影響，Westernblot方法檢測化學(xué)反應(yīng)后磷酸化Tau蛋白主要磷酸化位點表達(dá)的變化，進(jìn)一步探討Rd對AD模型動物的保護(hù)

5、的作用機制及其作用靶點。
　　實驗結(jié)果：（1）Rd（5，10，30mg/kg）對Aβ1-40急性腦損傷大鼠的學(xué)習(xí)記憶功能均有改善:能夠縮短海馬微量注射Aβ1-40大鼠水迷宮逃避潛伏期的時間、增加模型鼠穿越原平臺次數(shù)，減少模型鼠海馬CA1區(qū)神經(jīng)元的丟失；Rd（10mg/kg）可明顯改善APP轉(zhuǎn)基因小鼠的學(xué)習(xí)記憶功能：縮短APP轉(zhuǎn)基因小鼠水迷宮逃避潛伏期的時間、增加模型鼠穿越原平臺次數(shù)；Rd（2.5，5μM）能提高體外培養(yǎng)皮層神經(jīng)元的