光譜法研究頭孢西丁鈉、鹽酸吡格列酮等藥物與蛋白質(zhì)的反應(yīng)機(jī)理.pdf

1、蛋白質(zhì)-藥物是藥物進(jìn)入人體的暫時(shí)儲(chǔ)存形式，控制藥物向受體釋放、防止藥物快速新陳代謝。生物體服用藥物以后，藥物進(jìn)入血液進(jìn)行循環(huán)，其中游離型分子轉(zhuǎn)運(yùn)到組織，作用在發(fā)病部位發(fā)揮藥理作用。研究蛋白質(zhì)等生物大分子與小分子作用機(jī)制，為研究小分子的生物學(xué)效應(yīng)，藥物殘留檢測(cè)過程中提取液的選擇提供理論依據(jù)，而且對(duì)促進(jìn)蛋白質(zhì)組學(xué)的研究和發(fā)展也有著重要的意義。本文以牛血清白蛋白和溶菌酶為研究對(duì)象，用熒光光譜方法研究了藥物小分子與蛋白之間的相互作用，并且對(duì)研究

2、方法做了一些改進(jìn)。研究內(nèi)容分為七部分。
　　第一章：概括總結(jié)了蛋白質(zhì)對(duì)人類生命活動(dòng)的重要作用，藥物進(jìn)入人體后生物藥效發(fā)揮的過程及蛋白質(zhì)在藥物發(fā)揮藥效的過程中所占的地位。系統(tǒng)地講述了研究蛋白質(zhì)與藥物小分子相互作用的常規(guī)方法，以此為基礎(chǔ)，引出本文的立題思路。引用文獻(xiàn)51篇。
　　第二章：利用熒光猝滅法和同步熒光法比較研究了不同溫度下頭孢西丁鈉(CFXS)與牛血清白蛋白（BSA)之間的反應(yīng)機(jī)理。研究結(jié)果表明了同步熒光法所得結(jié)合常數(shù)

3、隨溫度的變化可以用來判斷BSA-CFXS體系的猝滅類型，其結(jié)果與熒光猝滅法一致，猝滅類型為靜態(tài)猝滅。并且在結(jié)合位點(diǎn)數(shù)，作用力類型，藥物與蛋白的協(xié)同性，結(jié)合距離等方面兩種方法結(jié)果基本相同，詮釋了同步熒光光譜法可以結(jié)合傳統(tǒng)的熒光猝滅法共同研究物質(zhì)與蛋白的反應(yīng)機(jī)理。
　　第三章：通過考察蛋白熒光變化的傳統(tǒng)熒光光譜法和觀察藥物熒光變化的彈性散射熒光法，分別研究了不同溫度下頭孢西丁鈉(CFXS)與牛血清白蛋白(BSA)之間的反應(yīng)機(jī)理。結(jié)果表

4、明CFXS通過靜態(tài)猝滅方式猝滅BSA的內(nèi)源熒光。兩種方法的結(jié)果基本一致。彈性散射熒光法得到的BSA-CFXS體系結(jié)合常數(shù)明顯大于傳統(tǒng)熒光光譜法所得參數(shù)，并用紫外吸收光譜法驗(yàn)證了彈性散射熒光法的正確性，表明以藥物熒光變化為考察對(duì)象研究藥物與蛋白的作用機(jī)理的方法更準(zhǔn)確、合理，并推測(cè)出藥物與蛋白之間存在一種“點(diǎn)對(duì)面”的作用方式。
　　第四章：利用熒光猝滅法和同步熒光法進(jìn)行了鹽酸吡格列酮(PGH)與牛血清白蛋白(BSA)之間反應(yīng)機(jī)理的比較

5、研究。結(jié)果表明：兩種方法在研究PGH-BSA體系的猝滅類型、結(jié)合常數(shù)、結(jié)合位置、作用力類型、協(xié)同性及能量轉(zhuǎn)移距離等方面，得到了相同的結(jié)果。表明同步熒光光譜法可以用于藥物與蛋白反應(yīng)機(jī)理的研究。
　　第五章：在Tris-HCl緩沖溶液中(pH=7.40)，利用研究對(duì)象為蛋白熒光變化的傳統(tǒng)熒光光譜法和考察對(duì)象為藥物熒光變化的彈性散射熒光法，比較研究了不同溫度下（298 K、310 K和318 K）鹽酸吡格列酮(PGH)與牛血清白蛋白(B

6、SA)之間的反應(yīng)機(jī)理。結(jié)果表明PGH與BSA之間猝滅方式為靜態(tài)猝滅，兩者主要通過靜電作用力結(jié)合，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)約為1；Hill系數(shù)nH等于1，表明BSA與后繼配體不存在協(xié)同作用。彈性散射熒光法得到的BSA-PGH體系結(jié)合常數(shù)顯著地大于傳統(tǒng)熒光光譜法所得，詮釋了考察藥物熒光變化研究藥物與蛋白的作用機(jī)理的方法更準(zhǔn)確、合理，并推測(cè)出藥物與蛋白之間存在一種“點(diǎn)對(duì)面”的作用方式。
　　第六章：本文利用熒光猝滅法和同步熒光法比較研究了298 K、

7、310 K和318 K溫度下玫瑰紅B(RHB)與牛血清白蛋白（BSA)之間的反應(yīng)機(jī)理。研究結(jié)果表明了RHB通過靜電作用力與 BSA結(jié)合使其發(fā)生熒光猝滅，猝滅類型為靜態(tài)猝滅；結(jié)合位置主要位于BSA的疏水亞結(jié)構(gòu)域ⅡA，結(jié)合位點(diǎn)數(shù)約為1，結(jié)合常數(shù)為104。nH約等于1，RHB對(duì)BSA的后繼配體無協(xié)同作用；r<7 nm，BSA與RHB間存在非輻射能量轉(zhuǎn)移。兩種研究方法結(jié)果相同，詮釋了同步熒光光譜法可以用于研究物質(zhì)與蛋白反應(yīng)機(jī)理。
　　第七

8、章：利用熒光光譜法研究了pH=7.40生理?xiàng)l件下酒石酸泰樂菌素(TT)與溶菌酶(LYSO)的相互作用。TT能夠使LYSO內(nèi)源性熒光產(chǎn)生強(qiáng)烈的猝滅作用，據(jù)此測(cè)定了不同溫度下 TT與 LYSO反應(yīng)的猝滅常數(shù)，表明該熒光猝滅過程為靜態(tài)猝滅。由Vant’s-Hoff方程式計(jì)算該反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù)：焓變?chǔ)和熵變?chǔ)值分別為27.80 KJ/mol，166.28 J/mol·K。表明了TT與LYSO間的作用力是以疏水作用力為主。同步熒光光譜研究表明