前扣帶皮層神經(jīng)元NMDA受體在痛情緒形成中的作用觀察.pdf

1、目的：
　　根據(jù)國際權(quán)威組織（國際疼痛研究學(xué)會(huì)，IASP）對(duì)疼痛含義的解釋，可以把疼痛分為兩個(gè)基本部分：感覺分辨（sensory-discrimination）及情緒反應(yīng)（emotional-affective dimensions）。大量研究已向我們揭示，疼痛的感覺部分及情緒反應(yīng)部分是由不同的中樞機(jī)制作用產(chǎn)生，并且是經(jīng)由相異的神經(jīng)傳導(dǎo)通路介導(dǎo)。人類和動(dòng)物的行為學(xué)、電生理學(xué)和腦成像等相關(guān)治療、實(shí)驗(yàn)結(jié)果已提供證據(jù)，位于大腦額葉內(nèi)側(cè)的

2、前扣帶皮層（anterior cingulate cortex，ACC），該核團(tuán)參與疼痛誘發(fā)的厭惡情緒的形成，及在不良情緒引起的行為表現(xiàn)方面起著重要作用，尤其是其吻側(cè)部ACC（rostral ACC，rACC）。經(jīng)手術(shù)或其他方式損毀動(dòng)物大腦雙側(cè)rACC組織，能夠抑制疼痛相關(guān)不良情緒誘發(fā)的條件性位置回避（conditioned place avoidance，CPA）行為的產(chǎn)生。根據(jù)部分臨床治療和基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)研究的結(jié)果提示，rACC神經(jīng)元上N

3、MDA受體的激活參與痛相關(guān)不良情緒的形成。
　　本實(shí)驗(yàn)使用的動(dòng)物模型為完全弗氏佐劑（complete Freund’s adjuvant，CFA）誘導(dǎo)的條件性位置回避（CFA-conditioned place avoidance，C-CPA）模型，結(jié)合rACC內(nèi)分別給予不同濃度NMDA受體的拮抗劑APⅤ或AMPA受體拮抗劑DNQX，測量 C-CPA行為反應(yīng)和熱痛行為反應(yīng)（熱縮足反射潛伏期，PWL），探究在此實(shí)驗(yàn)所使用的動(dòng)物模型中

4、，拮抗rACC內(nèi)NMDA受體是否對(duì)由CFA誘發(fā)的慢性炎癥性疼痛刺激引起的不良情緒反應(yīng)有緩解作用，并對(duì) NMDA受體在這一作用中可能涉及到的機(jī)制分析討論。
　　方法：
　　1.建立由完全弗氏佐劑誘導(dǎo)的慢性持續(xù)性炎癥性疼痛動(dòng)物模型。
　　本實(shí)驗(yàn)使用成年SD大鼠（雄性，250~270g），在其左側(cè)后足腳掌皮下注射CFA，建立慢性炎性痛模型。注射等劑量NS為對(duì)照。
　　2.CFA誘導(dǎo)的條件性位置回避（C-CPA）模型的建

5、立。將實(shí)驗(yàn)大鼠其隨機(jī)分為3組：
　　(1)未注射對(duì)照組；
　　(2)注射生理鹽水（NS）對(duì)照組；
　　(3)注射CFA實(shí)驗(yàn)組。n=6～12/組。將由注射CFA引起的慢性炎癥性疼痛作為特定的條件，并與可分辨的環(huán)境耦合，建立條件性位置回避（C-CPA）模型，同一實(shí)驗(yàn)組大鼠在“疼痛環(huán)境”中停留時(shí)間的基礎(chǔ)值與實(shí)驗(yàn)值和不同實(shí)驗(yàn)組間回避分?jǐn)?shù)（CPAscore）數(shù)值的比較，檢測CFA是否能使大鼠有條件位置回避行為。
　　3.用

6、C-CPA模型檢測APⅤ或DNQX對(duì)痛情緒的影響。
　　實(shí)驗(yàn)分22個(gè)組。n=6～9/組。
　　Group1（2組）：大鼠左側(cè)后足腳掌注射CFA/NS，rACC區(qū)微量注射NS；
　　Group2（10組）：大鼠左側(cè)后足腳掌注射CFA，rACC區(qū)分別注射0.5/2/8/12/16nmol/μl APⅤ或DNQX；
　　Group3（10組）：大鼠左側(cè)后足腳掌NS，rACC區(qū)分別注射0.5/2/8/12/16nmol/

7、μl APⅤ或DNQX。
　　4.檢測熱縮足反射潛伏期（Paw Withdrawal Thermal latency，PWL）。
　　在C-CPA的Day1和Day3行為訓(xùn)練結(jié)束后，檢測大鼠PWL，觀察在rACC區(qū)注射不同劑量APⅤ或DNQX后大鼠的熱痛行為。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠后足腳掌注射CFA可誘導(dǎo)產(chǎn)生C-CPA反應(yīng)。
　　大鼠左側(cè)后足腳掌注射CFA組、注射NS組和未注射對(duì)照組比較，注射CFA組大

8、鼠PWL在Day3處理后與Day1基礎(chǔ)值相比明顯縮短，其余兩組無明顯變化。說明后足底腳掌注射CFA可引起大鼠炎癥性疼痛。
　　未注射對(duì)照組和后足腳掌注射注射NS對(duì)照組中，大鼠Day3在“疼痛環(huán)境”匹配室的停留時(shí)間與Day1相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，兩個(gè)組的回避分?jǐn)?shù)相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。后足腳掌注射CFA，大鼠在Day3“疼痛環(huán)境”匹配室停留時(shí)間明顯少于Day1。與未注射對(duì)照組及注射 NS對(duì)照組的回避分?jǐn)?shù)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，所以大鼠對(duì)“疼痛環(huán)境

9、”產(chǎn)生痛相關(guān)不良情緒。
　　2.rACC區(qū)內(nèi)注射APⅤ拮抗神經(jīng)元上NMDA受體可緩解C-CPA。
　　在大鼠左側(cè)后足腳掌和rACC內(nèi)分別給予CFA和NS的處理組中，Day3 CPA實(shí)驗(yàn)測量的基礎(chǔ)值明顯少于Day1測量的實(shí)驗(yàn)值，回避分?jǐn)?shù)數(shù)值較大，產(chǎn)生對(duì)“疼痛環(huán)境”的厭惡情緒。大鼠后足腳掌注射 CFA且在 rACC分別注射劑量不相同0.5/2/8/12/16（nmol/μl）APⅤ的處理組，當(dāng)注射小劑量APⅤ（0.5nmol/μ

10、l）時(shí)，APⅤ未發(fā)揮作用，表現(xiàn)為大鼠Day3在“疼痛環(huán)境”匹配室停留的時(shí)間和Day1相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并未形成CPA反應(yīng)；隨著APⅤ注射劑量增加（2/8nmol/μl），回避分?jǐn)?shù)逐漸減小，兩劑量組間沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但與注射NS組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即緩解了 CPA反應(yīng)；繼續(xù)增加注射劑量（12/16nmol/μl），回避分?jǐn)?shù)逐漸增加，與注射NS組相比沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即未形成CPA反應(yīng)。后足腳掌注射NS及rACC內(nèi)分別注射不同劑量的（0.5

11、/2/8/12/16nmo/μl）APⅤ的處理組與后足腳掌無處理，各組回避分?jǐn)?shù)與后足腳掌注射NS及rACC內(nèi)注射NS處理組之間均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，即單純r(jià)ACC內(nèi)注射APⅤ不會(huì)使大鼠形成C-CPA或CPP反應(yīng)。
　　3.rACC區(qū)內(nèi)注射DNQX對(duì)C-CPA反應(yīng)沒有緩解作用。
　　大鼠后足腳掌注射 CFA， rACC內(nèi)注射不同濃度的 DNQX（0.5/2/8/12/16nmol/μl），各組的回避分?jǐn)?shù)與大鼠后足腳掌注射CFA，r

12、ACC內(nèi)注射NS的處理組相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，說明在rACC區(qū)內(nèi)注射DNQX沒有緩解由CFA誘發(fā)的痛厭惡情緒的作用。大鼠后足腳掌注射 NS，rACC區(qū)內(nèi)注射不同濃度的DNQX（0.5/2/8/12/16nmol/μl），五個(gè)劑量組的回避分?jǐn)?shù)與大鼠后足腳掌注射 NS， rACC內(nèi)注射NS的處理組相比，沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，rACC內(nèi)注射QNDX不會(huì)使大鼠形成CPP反應(yīng)。
　　4.rACC區(qū)注射APⅤ或DNQX不改變由CFA引起的熱痛反應(yīng)行

13、為表現(xiàn)。
　　大鼠后足腳掌注射CFA，rACC注射APⅤ或DNQX的各組大鼠PWL在處理后比處理前明顯縮短，處理后各組PWL無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　結(jié)論：
　　1.拮抗 rACC內(nèi) NMDA受體可緩解由 CFA致痛引發(fā)的痛情緒，較小劑量（2/8nmol/μl）的APⅤ即可發(fā)揮作用；注射12或16nmol/μl APⅤ的大鼠的CPA反應(yīng)并未緩解。單純r(jià)ACC內(nèi)注射APⅤ不會(huì)產(chǎn)生CPP。
　　2.拮抗rACC內(nèi)AMPA受