毛細(xì)管電泳檢測(cè)尿蛋白及泌尿系細(xì)菌方法研究.pdf

1、目的：近年來(lái)，毛細(xì)管電泳(CE)因其理論結(jié)構(gòu)成熟，且檢測(cè)成本低、操作簡(jiǎn)便、耗時(shí)短等獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)而廣泛的應(yīng)用到多種疾病的研究中。其中，以毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)作為分離模式的分析方法最為常見。隨著質(zhì)譜技術(shù)的不斷發(fā)展和普及，使用毛細(xì)管電泳與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(CE-MS)成為了各大課題研究的焦點(diǎn)。然而，質(zhì)譜分析過(guò)程繁瑣，實(shí)驗(yàn)成本高昂等問(wèn)題對(duì)研究成果的轉(zhuǎn)化構(gòu)成了很大的障礙，難以在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)使用毛細(xì)管電泳與二極管陣列檢測(cè)聯(lián)用技術(shù)(CE-DA

2、D)建立半定量手段的尿液蛋白差異化檢測(cè)方法和細(xì)菌鑒定方法，優(yōu)化膀胱癌患者尿液特異性蛋白的檢測(cè)條件，初步探索泌尿系感染常見致病菌類型的快速鑒定手段。
　　方法：對(duì)5例膀胱癌患者及5例健康志愿者尿液蛋白中的低豐度蛋白進(jìn)行含量的差異檢測(cè)，分別對(duì)檢測(cè)波長(zhǎng)，分離環(huán)境的pH值進(jìn)行了選擇和優(yōu)化，并使用電解質(zhì)添加劑對(duì)原緩沖體系進(jìn)行了優(yōu)化，對(duì)電滲流進(jìn)行有效控制，穩(wěn)定了分離過(guò)程中毛細(xì)管兩端的電流，提高檢測(cè)的重復(fù)性，同時(shí)也提高了低豐度蛋白的分離效率；選

3、取6種泌尿系感染常見致病菌的標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行培養(yǎng)，并以臨床中確診的臨界濃度取樣，模擬患者樣品中的濃度進(jìn)行毛細(xì)管電泳的分離分析實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化分離條件，提高各細(xì)菌菌株的分離度。
　　結(jié)果：確立了使用毛細(xì)管電泳與二極管陣列檢測(cè)聯(lián)用技術(shù)對(duì)正常人組與非肌層浸潤(rùn)性膀胱癌患組尿液蛋白的差異檢測(cè)最佳條件。結(jié)果顯示，共有6個(gè)蛋白峰在兩組電泳圖譜中共同存在，經(jīng)過(guò)t檢驗(yàn)，其中4個(gè)蛋白峰顯示兩組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，余下2個(gè)差異不明顯；另外，還有6個(gè)蛋白峰為膀胱

4、癌患者特異蛋白峰，只存在于實(shí)驗(yàn)組的電泳圖譜中；經(jīng)ELISA法平行試驗(yàn)，顯示兩組低豐度蛋白存在差異相關(guān)性；建立了使用毛細(xì)管電泳與二極管陣列檢測(cè)聯(lián)用技術(shù)對(duì)鑒定泌尿系感染常見致病菌的檢測(cè)方法，經(jīng)過(guò)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考察，各菌株的遷移時(shí)間在多次測(cè)量后已基本確定，可用于在同樣實(shí)驗(yàn)條件下鑒定菌株種類，同時(shí)本實(shí)驗(yàn)對(duì)雙菌種感染的分離條件和檢測(cè)情況進(jìn)行了探索和研究，提出了在電滲流驅(qū)動(dòng)的同時(shí)使用氣壓壓力輔助推進(jìn)可以有效分離兩個(gè)相近易感染菌株。
　　結(jié)論：毛細(xì)