龍芽楤木體細(xì)胞胚發(fā)生過程中特異性蛋白表達(dá)差異的研究.pdf

1、該論文采用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳技術(shù),對(duì)龍芽楤木體細(xì)胞胚發(fā)生過程中愈傷組織形態(tài)建成、胚性愈傷轉(zhuǎn)化、胚狀體發(fā)育和植株再生四個(gè)階段的可溶性蛋白的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行分析.根據(jù)可溶性蛋白動(dòng)態(tài)變化的特點(diǎn),我們建立了龍芽楤木體細(xì)胞胚發(fā)生過程的蛋白質(zhì)表達(dá)模型,并找到了一些與體細(xì)胞胚發(fā)生相關(guān)的特異性蛋白.由于體細(xì)胞胚胎發(fā)生還受到一系列內(nèi)外環(huán)境因素的調(diào)節(jié),所以研究外界因子對(duì)特異性蛋白表達(dá)的影響也是研究體細(xì)胞胚發(fā)生過程分子機(jī)制的重要組成部分.我們探討了植物激

2、素、活性炭和蔗糖三種外界因子對(duì)體細(xì)胞胚的調(diào)控機(jī)理,試圖進(jìn)一步揭示體細(xì)胞胚發(fā)生的分子基礎(chǔ). 龍芽楤木體細(xì)胞胚發(fā)生過程中可溶性蛋白表達(dá)模型的建立,從整體上體現(xiàn)了可溶性蛋白表達(dá)的時(shí)空特異性. 在龍芽楤木體細(xì)胞胚發(fā)生過程中,我們發(fā)現(xiàn)了若干胚胎發(fā)生相關(guān)蛋白.正是這些胚胎發(fā)生相關(guān)蛋白的選擇性表達(dá)促成了體細(xì)胞胚的發(fā)生和發(fā)育.首先,在胚性愈傷和胚狀體發(fā)育階段特異性表達(dá)的蛋白組分有49KD、40KD、31KD、22KD和20KD.其中49KD在胚性愈傷組

3、織、球形胚和成熟的子葉胚三個(gè)階段共同表達(dá),31KD在胚性愈傷組織、球形胚和心形胚三個(gè)階段共同表達(dá).它們可以分別作為胚性愈傷組織、胚狀體發(fā)育階段或其中某一特定時(shí)期的分子標(biāo)記.另外,53KD蛋白組分的表達(dá)量在胚狀體發(fā)育階段明顯增加,該種蛋白組分可能也對(duì)胚狀體的發(fā)育起到了促進(jìn)作用.其次,70KD、63KD、55KD、45KD和36KD的表達(dá)都起始于愈傷組織形態(tài)建成階段,并在整個(gè)龍芽楤木離體培養(yǎng)再生體系中動(dòng)態(tài)表達(dá).其中36 KD蛋白組分在胚性愈

4、傷組織和胚狀體中表達(dá)而在非胚性愈傷組織和再生植株中不表達(dá),它是直接與愈傷組織胚性發(fā)生能力相關(guān)的特異性蛋白.55 KD蛋白組分受生長素2,4-D的負(fù)調(diào)控,并對(duì)體細(xì)胞胚的發(fā)生具有顯著的促進(jìn)作用.這些早期表達(dá)的蛋白組分可能是植物中共同存在的體細(xì)胞胚發(fā)生相關(guān)蛋白,對(duì)胚狀體發(fā)生的決定起著重要作用.此外,我們還發(fā)現(xiàn),與愈傷組織增殖有關(guān)的43 KD愈傷組織特異性蛋白;在胚性愈傷組織和胚狀體發(fā)生階段特異性缺失的35 KD蛋白組分,它可能與胚狀體發(fā)生能力