光熱治療聯(lián)合免疫治療復(fù)合制劑抗腫瘤活性研究.pdf

1、光熱治療（PTT）憑借其局部、高效、副作用小等優(yōu)勢(shì)迅速成為腫瘤治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)。其原理是利用富集在腫瘤部位的光熱試劑在入射光激發(fā)下，利用其光熱轉(zhuǎn)換效應(yīng)產(chǎn)生熱量，可使腫瘤局部溫度升高從而實(shí)現(xiàn)殺傷腫瘤細(xì)胞的作用。納米給藥系統(tǒng)可將光熱轉(zhuǎn)換物質(zhì)通過(guò)增強(qiáng)滲透和滯留效應(yīng)（enhanced permeation and retention effect，EPR效應(yīng)）靶向到腫瘤部位，可降低全身系統(tǒng)毒性，顯著提高了腫瘤治療效果。近年來(lái)，免疫治療（Immun

2、e Therapy，IT）作為一種新型抗腫瘤技術(shù)備受關(guān)注。其主要目的是通過(guò)激活機(jī)體的免疫功能，增強(qiáng)免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別能力，從而實(shí)現(xiàn)機(jī)體自動(dòng)清除腫瘤細(xì)胞。然而，免疫治療對(duì)于實(shí)體腫瘤的治療效果具有局限性，只能作為一種輔助手段聯(lián)合其他抗腫瘤技術(shù)，協(xié)同發(fā)揮抗腫瘤效果。最新研究表明，PTT不僅能對(duì)腫瘤組織造成不可逆損傷，還能刺激機(jī)體的免疫功能，因此將PTT與IT聯(lián)合應(yīng)用能達(dá)到協(xié)同抗腫瘤作用。本文設(shè)計(jì)了由包載有機(jī)光熱試劑Cypate的脂質(zhì)體、

3、免疫原阿霉素-牛血清蛋白（ADM-BSA）以及分子橋透明質(zhì)酸-阿霉素（HA-ADM）組成的抗腫瘤復(fù)合制劑。
　　本文首先闡述了近幾年關(guān)于光熱治療、免疫治療與激光免疫治療的研究背景以及在腫瘤治療領(lǐng)域研究進(jìn)展，并在此礎(chǔ)上闡明了本論文的立題依據(jù)及研究?jī)?nèi)容。然后通過(guò)溶劑揮發(fā)法制備了Cypate脂質(zhì)體，并對(duì)其理化性質(zhì)和體內(nèi)外藥效學(xué)性質(zhì)進(jìn)行考察。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，Cypate脂質(zhì)體形態(tài)為球形、平均粒徑（111.9±5.94）nm、包封率（98.1

4、1±1.13）％；Cypate脂質(zhì)體同游離Cypate相比，體外升溫效果和單線態(tài)氧產(chǎn)量明顯提高，且具有較好的物理穩(wěn)定性。體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果表明，與游離Cypate相比，Cypate脂質(zhì)體細(xì)胞攝取量較高，并能定位于酸性細(xì)胞器溶酶體中，且在激光照射下具有明顯的光熱殺傷作用，4T1腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)指標(biāo)IC50降低89.99%（P<0.01），而無(wú)明顯的暗毒性。在體內(nèi)動(dòng)物試驗(yàn)中，組織分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Cypate經(jīng)脂質(zhì)體包載后在腫瘤部位富集量提高了57

5、.7%，且96 h內(nèi)在腫瘤部位仍有滯留。熱成像結(jié)果顯示，在激光照射下，濃度為3.0 mg·kg-1的Cypate脂質(zhì)體可使腫瘤部位溫度升高＞20℃。同時(shí)，單劑量（以Cypate計(jì)，3.0 mg·kg-1）尾靜脈給藥并在24小時(shí)后對(duì)腫瘤組織進(jìn)行近紅外激光照射，即可產(chǎn)生有效的抗腫瘤光熱治療效果。同時(shí)基于實(shí)驗(yàn)前期研究以及抗原-抗體和受體-配體間的相互作用理論，通過(guò)戊二醛交聯(lián)法合成外源性免疫原ADM-BSA,經(jīng)過(guò)透析純化后，采用紫外-可見(jiàn)分光光

6、度法和傅里葉紅外分光光度法對(duì)其進(jìn)行鑒別，并通過(guò)BCA定量法計(jì)算ADM和BSA的偶聯(lián)率為12.8。然后通過(guò)ELISA法分別測(cè)定經(jīng)皮下免疫健康小鼠和荷瘤小鼠血清中抗ADM抗體，結(jié)果表明免疫原ADM-BSA具有較好的免疫原性，能刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性抗體。此外，將HA和ADM通過(guò)酰胺反應(yīng)合成分子橋HA-ADM，MTT和細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，與游離ADM相比，HA-ADM對(duì)鼠源性乳腺癌細(xì)胞以及人源性宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用明顯增強(qiáng)，IC50

7、下降了86.7%，且細(xì)胞攝取量明顯提高，表明HA-ADM對(duì)腫瘤細(xì)胞具有良好的靶向性。同時(shí)，細(xì)胞ELISA結(jié)果表明HA-AD具有橋聯(lián)作用，使腫瘤細(xì)胞表面形成了“CD44-HA-ADM-抗ADM抗體”復(fù)合物，從而增強(qiáng)機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別作用。體內(nèi)藥效學(xué)結(jié)果顯示，以免疫原ADM-BSA和分子橋HA-ADM為基礎(chǔ)的免疫治療抑瘤率為25.55%，具有一定的腫瘤生長(zhǎng)抑制作用，但治療效果有限。最后將Cypate脂質(zhì)體、免疫原ADM-BSA以及