抗體、磁性納米顆粒連接阿霉素靶向腫瘤新藥的制備.pdf

1、研究背景:目前腫瘤為危害人類健康的第一大殺手?；熑匀蛔鳛槟[瘤治療的重要的手段,而阿霉素是其中主要化療藥物之一。阿霉素具有廣譜的抗腫瘤作用,但是其心臟毒性限制了阿霉素的應用,以致無法加大劑量殺傷腫瘤細胞。提高阿霉素在腫瘤局部組織中的濃度,降低其在人體正常組織中的濃度是提高其治療效果的方法之一?；诳乖贵w的結合具有特異性,已有前人將抗體片段與化療藥物連接,證明了抗體的靶向作用[1,2]。磁性納米材料包裹化療藥,在外界磁場作用下,亦能實現(xiàn)

2、化療藥物的靶向治療,結果證實療效提高[3-6]。但仍未有實驗實現(xiàn)抗體與磁性納米材料偶聯(lián)化療藥物的雙靶向治療。本實驗重點研究如何將抗體片段與磁性納米材料同時與阿霉素連接,以起到雙靶向作用。
　　 方法:將雜交瘤細胞注入小鼠腹腔誘生腹水,打開腹腔獲取腹水后將其離心去沉淀,上清用蛋白A柱體提純IgG抗體,利用蛋白電泳鑒定其真實性。利用木瓜蛋白酶將IgG分解,經(jīng)蛋白A除去Fc段及未分解的IgG以提純Fab片段[7],蛋白電泳和免疫組化鑒

3、定Fab。將Fab先后與阿霉素和磁性納米顆粒連接,免疫組化和免疫熒光檢測其有效性,通過體外殺傷實驗觀察其對腫瘤細胞的殺傷作用。
　　 結果:從腹水中可以提取到純度很高的IgG分子,經(jīng)過蛋白酶消化后的Fab片段保持了其抗體活性,連接阿霉素與磁性納米顆粒的過程成功,Fab活性保留,經(jīng)免疫熒光顯示,抗體分子可將阿霉素帶入腫瘤細胞內(nèi)。
　　 結論:雜交瘤可成功產(chǎn)生抗體,蛋白酶消化后可獲得保留抗體活性的Fab片段,在連接阿霉素和磁