VEGI對腦外傷小鼠小膠質(zhì)細胞的激活與極化影響.pdf

1、研究目的：
　　近期研究結(jié)果表明，顱腦外傷后腦內(nèi)的炎癥反應能加劇繼發(fā)性腦損傷的病理生理過程，這些變化若持續(xù)存在會加重腦水腫的癥狀、增高顱內(nèi)壓、進一步導致神經(jīng)元細胞的凋亡，引起神經(jīng)功能癥狀，極大加重了原發(fā)性腦損傷造成的危害。血管內(nèi)皮細胞生長抑制因子（Vascular Endothelial Growth Inhibitor, VEGI）是腫瘤壞死因子超家族的成員之一，顧名思義，VEGI具有抑制腫瘤新生血管的特性，除此之外，其還在多種

2、疾病中發(fā)揮重要作用。近期，VEGI因在炎癥性腸病中的作用而受到廣泛關注。因此VEGI除了作用于新生血管抑制腫瘤生長，還能調(diào)節(jié)炎癥反應和抑制水腫生成。本實驗課題采用的是液壓打擊的方法來制作小鼠閉合性顱腦損傷的模型，在此基礎上我們探討小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞激活和極化的時間點變化，同時我們給予VEGI干預治療，與對照組相比較觀察VEGI會不會調(diào)控小膠質(zhì)細胞的激活甚至極化。我們也探討給予VEGI干預后小鼠腦外傷后的腦水腫和神經(jīng)功能的恢復情況是

3、否有所改善。
　　研究方法：
　　制備腦外傷動物模型的方法有多種，本課題我們采用較為成熟的液壓打擊法（FPI）來制備小鼠閉合性顱腦外傷的模型，所選取的實驗動物為SPF級健康成年雄性小鼠C57老鼠180只，對每只小鼠進行編號，按照隨機數(shù)列表，隨機將小鼠分為假手術組（Sham組）、腦外傷組（TBI組）、腦外傷后鼠尾靜脈注射VEGI干預組（TBI+VEGI組）進行實驗研究。其中腦外傷組繼續(xù)分組，根據(jù)傷后時間點的不同，將組內(nèi)小鼠分為

4、傷后1h、6h、1d、3d、7d、14d和21d組，每組小鼠數(shù)量保持為5只，處死動物取出小鼠腦組織，進行石蠟包埋切片制備成組織切片，采用免疫組化的技術，觀察小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細胞的浸潤情況。腦外傷后腹腔注射VEGI干預組（TBI+VEGI組）根據(jù)傷后處死時間點不同，再分為傷后1 d、3 d、5d、7 d組，每組動物5只，按照同樣的方法，觀察VEGI+TBI組小鼠傷灶周圍的小膠質(zhì)細胞變化情況。為了觀察VEGI+TBI組小鼠和TBI組小鼠

5、在腦外傷后第1天和第3天的腦水腫情況，我們采用干濕重的方法進行計算腦組織中的水含量。而血腦屏障的通透性采用伊文氏藍滲透的方法，用熒光密度儀測含量，計算出通透性的大小。神經(jīng)功能情況采用改良神經(jīng)功能評分法（mNSS）的方法，相對可靠客觀。
　　研究結(jié)果：
　　應用液壓打擊方法成功建立中度小鼠顱腦損傷模型，用HE染色后每個組小鼠腦組織均觀察到典型的 TBI后的病理變化，出現(xiàn)創(chuàng)傷灶。免疫組織化學染色顯示，小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞被激

6、活，出現(xiàn)不同亞型（M1型和 M2型），并且廣義小膠質(zhì)細胞在傷后第7天達到高峰，隨后下降，而M1型和M2型小膠質(zhì)細胞在第5天到達峰值，M1型維持在高值，隨后緩慢下降，M2型高峰后迅速降低。TBI+VEGI組與TBI組相比，在小鼠顱腦外傷后第3天，第5天，第7天TBI+VEGI組小鼠創(chuàng)傷灶周圍小膠質(zhì)細胞的浸潤數(shù)量明顯減少（P＜0.05）。進一步研究發(fā)現(xiàn)，VEGI可以影響小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞的極化，與TBI組相比，TBI+VEGI組小鼠外

7、傷后 M1型（CD11C+）小膠質(zhì)細胞數(shù)量明顯減少，而M2型（Arg-1+）小膠質(zhì)細胞數(shù)量則比TBI組明顯增多，各時間點差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。干濕重法觀察發(fā)現(xiàn)：小鼠顱腦外傷后，與空白對照組相比， TBI組和TBI+VEGI組腦水含量均明顯增加；在傷后第3,5,7天，給予VEGI干預的小鼠腦組織中水含量明顯低于單純 TBI組，且各個時間點之間均有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。伊文氏藍滲透率實驗發(fā)現(xiàn)：在給予VEGI干預后小鼠血腦

8、屏障的滲透率明顯降低，低于TBI組，兩者之間具有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。
　　研究結(jié)論：
　　1、小鼠顱腦外傷后小膠質(zhì)細胞能夠被激活，并在傷后第7天達到峰值，M1型小膠質(zhì)細胞第5天達到峰值，隨后輕微降低，M2型小膠質(zhì)細胞第5天達到峰值，隨后降低。
　　2、小鼠顱腦外傷后腦水腫急劇增加，在第3天達到高峰。
　　3、VEGI減少TBI后小膠質(zhì)細胞的激活，并且可以抑制M1型小膠質(zhì)細胞的激活，增加了M2型小膠質(zhì)細胞的