負(fù)壓創(chuàng)面療法治療銅綠假單胞菌感染創(chuàng)面的相關(guān)機制研究.pdf

1、研究背景與目的：
　　在醫(yī)療領(lǐng)域，皮膚軟組織感染仍然是亟需解決的難題。由感染導(dǎo)致的創(chuàng)面延遲愈合、不愈合，病情加重，住院時間延長等等給患者帶來了沉重的心理及經(jīng)濟負(fù)擔(dān)。臨床上，負(fù)壓創(chuàng)面療法被廣泛用于處理開放傷可能伴有感染的患者，且方法有效。然而，原因與機制并不完全清楚。有研究發(fā)現(xiàn)負(fù)壓環(huán)境下創(chuàng)面細菌數(shù)量會發(fā)生變化，這可能是負(fù)壓創(chuàng)面療法減輕感染的機制之一。而負(fù)壓環(huán)境下銅綠假單胞菌的細菌數(shù)量、毒素毒力等變化機制目前相關(guān)研究甚少。本研究采用銅

2、綠假單胞菌感染軟組織損傷的模型，研究負(fù)壓環(huán)境對銅綠假單胞菌體外體內(nèi)增殖、毒素分泌、毒力表達以及生物膜的相關(guān)作用及其機制。
　　研究方法：
　　1.創(chuàng)建銅綠假單胞菌PAO1體外增殖模型，觀察負(fù)壓對細菌增殖的相關(guān)作用。應(yīng)用銅綠假單胞菌PAO1侵染軟組織損傷動物模型，通過負(fù)壓創(chuàng)面療法與常規(guī)紗布治療的對照研究，采用多點取材培養(yǎng)法分析創(chuàng)面軟組織內(nèi)細菌數(shù)量的變化趨勢及其原因。
　　2.采用上述動物模型，通過酶聯(lián)免疫吸附法、濃硫酸-

3、苔黑酚法、彈性蛋白-剛果紅法檢測創(chuàng)面軟組織內(nèi)毒素含量，通過掃描電鏡、刀豆蛋白A染色等方法觀察創(chuàng)面生物膜的變化。
　　3.采用上述動物模型，通過實時熒光定量PCR(Real-time PCR)法評估銅綠假單胞菌毒素及生物膜調(diào)控基因表達變化。
　　結(jié)果：
　　1.負(fù)壓作用下銅綠假單胞菌在LB固體培養(yǎng)基上增殖24小時、48小時細菌生長直徑均小于非負(fù)壓組，p＜0.01。
　　2.與常規(guī)紗布組相比，負(fù)壓創(chuàng)面療法治療下創(chuàng)面軟

4、組織內(nèi)細菌數(shù)量減少明顯，在治療的第四、六、八天軟組織內(nèi)細菌數(shù)量較常規(guī)紗布治療組低，p＜0.01。但是兩種治療方法均沒能將創(chuàng)面細菌數(shù)量降低到臨床感染標(biāo)準(zhǔn)（10^5 CFU/g組織）以下。
　　3.與常規(guī)紗布組相比，負(fù)壓創(chuàng)面療法組創(chuàng)面軟組織內(nèi)細菌外毒素A、鼠李糖脂、彈性蛋白酶等毒素含量相對較低。
　　4.負(fù)壓創(chuàng)面療法能夠減少創(chuàng)面銅綠假單胞菌生物膜。
　　5.負(fù)壓創(chuàng)面療法可以顯著抑制銅綠假單胞菌toxA，rhlA，LasB,

5、 Lasl, RhlI等基因表達水平。
　　結(jié)論：
　　1.負(fù)壓環(huán)境可以有效的抑制銅綠假單胞菌的增殖。負(fù)壓創(chuàng)面療法在一定程度上可以減少創(chuàng)面軟組織內(nèi)細菌數(shù)量，且效果優(yōu)于常規(guī)紗布治療。
　　2.負(fù)壓與引流的綜合作用可以減少創(chuàng)面軟組織內(nèi)銅綠假單胞菌毒素的含量，且效果優(yōu)于常規(guī)紗布治療。負(fù)壓環(huán)境可以抑制創(chuàng)面上銅綠假單胞菌毒素調(diào)控基因、生物膜調(diào)控基因的表達水平。
　　3.負(fù)壓創(chuàng)面療法減輕銅綠假單胞菌創(chuàng)面感染的機制有抑制創(chuàng)面細