小膠質(zhì)細胞在糖及胰島素聯(lián)合作用模型下的功能變化.pdf

1、目的：
　　我們前期研究發(fā)現(xiàn)胰島素可對小膠質(zhì)細胞的功能及其分泌的神經(jīng)生長因子（NGF）產(chǎn)生影響，本實驗基于前期研究，探討在糖和胰島素聯(lián)合作用模型下小膠質(zhì)細胞的功能變化及NGF的高親和性受體TrkA表達量變化。
　　方法：
　　用BV2細胞株代表小膠質(zhì)細胞，PC12細胞株代表神經(jīng)元。將BV2細胞作為研究對象，以PC12細胞存活率反映其功能。實驗分為低糖組（葡萄糖5mmol/L）、對照組（葡萄糖10mmol/L）、高糖組(

2、葡萄糖23mmol/L)以及波動組（起始葡萄糖濃度為5mmol/L，2小時后增至23mmol/L，3小時后再降至5mmol/L，以此再做兩個循環(huán)，然后以23mmol/L過夜），將各組的BV2細胞分別用0ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、150ng/ml的胰島素處理，培養(yǎng)24h后收集上清液，用以培養(yǎng)PC12細胞。將收集好的BV2細胞上清液分別加入PC12細胞中。繼續(xù)培養(yǎng)PC12細胞1h，采用MTT法檢測各組PC12細胞存活率，

3、應用Western-blot法檢測各組BV2細胞TrkA的表達情況，明確不同糖濃度與胰島素聯(lián)合作用對BV2細胞功能以及TrkA表達量的影響。應用雙色紅外激光成像系統(tǒng)，對條帶進行檢測，獲取條帶的圖像，利用灰度值分析軟件對條帶灰度值進行定量，最后以目的蛋白的灰度值比內(nèi)參的灰度值表示蛋白表達量。數(shù)據(jù)應用SPSS20.0軟件進行統(tǒng)計學分析，數(shù)值均以均數(shù)±標準差(-x±s)表示。組內(nèi)比較采用單因素方差分析，若差異具有顯著性，則進一步行LSD-t檢

4、驗；組間比較用獨立樣本t檢驗，假設(shè)檢驗顯著性水平均設(shè)定為0.05。
　　結(jié)果：
　　1.低糖組、對照組、高糖組以及波動組在胰島素濃度為0ng/ml時，PC12細胞存活率依次為56.75±0.84%、64.06±1.8%、72.05±0.75%、53.91±1.23%；對應各組在胰島素濃度為50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml時PC12細胞存活率依次為58.58±1.80%、68.37±1.25%、74.47±0

5、.21%、56.05±0.34%；1.64±0.61%、71.49±1.59%、77.16±2.37%、58.01±0.82%；50.66±0.82%、59.72±1.46%、63.15±0.21%、47.69±0.66%。同一胰島素濃度下，與對照組相比，高糖組PC12細胞存活率均顯著增高（P＜0.05）；低糖組及波動組的PC12細胞存活率降低（P＜0.01），且波動組其存活率更低（P＜0.05）；并且在糖濃度穩(wěn)定和適宜濃度胰島素（10

6、0ng/ml）聯(lián)合時PC12細胞存活率較高，葡萄糖濃度波動和高濃度胰島素(＞100ng/ml)聯(lián)合時PC12細胞存活率較低。
　　2.低糖組、對照組、高糖組以及波動組在胰島素濃度為0ng/ml時，BV2細胞 TrkA蛋白表達量依次為7.12±0.89、8.81±0.29、10.01±0.30、7.17±2.64；對應各組在胰島素濃度為50ng/ml、100ng/ml和150ng/ml時BV2細胞 TrkA蛋白表達量依次為22.53

7、±0.40、24.34±0.67、26.34±0.67、21.41±7.24；55.42±1.01、76.27±0.89、83.10±3.85、35.66±0.69；50.71±1.59、51.7±0.55、54.51±1.09、24.96±0.92。同一胰島素濃度下，與對照組相比，高糖組的BV2細胞TrkA蛋白表達量顯著增高（P＜0.05）；而低糖組及波動組的BV2細胞TrkA蛋白表達量降低（P＜0.05），且波動組其表達量更低（P＜

8、0.05）。隨著胰島素濃度的升高（胰島素濃度≤100 ng/ml），BV2細胞TrkA蛋白表達量逐漸增多（P＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　1.小膠質(zhì)細胞在一定濃度的糖和胰島素作用下發(fā)揮神經(jīng)保護性作用，而在低糖(5mmol/L)、糖波動或者高濃度胰島素(＞100ng/ml)時表現(xiàn)為損傷性作用，且在糖波動聯(lián)合高濃度胰島素(＞100ng/ml)時損傷性作用最強；
　　2.小膠質(zhì)細胞發(fā)揮保護性作用時TrkA的表達量增多，而其