FGF-21在抵抗素引發(fā)胰島素抵抗的肝細(xì)胞模型中的糖代謝作用.pdf

1、隨著人們生活水平的不斷提高，糖尿病逐漸發(fā)展成為全球性疾病，嚴(yán)重影響人類健康。胰島素抵抗是指機(jī)體對(duì)胰島素敏感性降低，是2型糖尿病發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制，與多種代謝異常有關(guān)。肝臟作為人體內(nèi)重要的血糖調(diào)控器官，也是發(fā)生胰島素抵抗的主要器官。解決胰島素抵抗時(shí)期機(jī)體的糖代謝紊亂一直是糖尿病研究的熱點(diǎn)。但胰島素抵抗的具體誘導(dǎo)因素與發(fā)病機(jī)制還不是很清楚，抵抗素是2001年Steppan等發(fā)現(xiàn)的一種與胰島素抵抗有密切聯(lián)系的細(xì)胞因子，研究表明，抵抗素作用于肝

2、臟，促進(jìn)糖異生關(guān)鍵酶表達(dá)和肝糖原分解，使肝糖輸出增加，從而參與肝臟胰島素抵抗的形成，進(jìn)而進(jìn)一步削弱胰島素對(duì)機(jī)體血糖的調(diào)控能力。FGF-21是人體內(nèi)一個(gè)重要的糖代謝調(diào)節(jié)因子，肝臟是FGF-21發(fā)揮生物學(xué)活性的重要靶器官，高濃度胰島素刺激而導(dǎo)致的胰島素抵抗的細(xì)胞仍能對(duì)FGF-21做出有效應(yīng)答，F(xiàn)GF21在抵抗素引起的胰島素抵抗?fàn)顟B(tài)下是否仍然具有調(diào)節(jié)糖代謝作用尚無報(bào)道。
　　 本研究的目的是通過構(gòu)建過表達(dá)人抵抗素的胰島素抵抗肝細(xì)胞模型

3、，檢測(cè)FGF-21在抵抗素過表達(dá)引發(fā)胰島素抵抗的肝細(xì)胞中的糖代謝作用。本研究構(gòu)建人抵抗素真核表達(dá)載體，轉(zhuǎn)染HepG2細(xì)胞，利用流式細(xì)胞儀篩選出過表達(dá)抵抗素的HepG2模型細(xì)胞，分別用不同濃度的胰島素和FGF-21刺激細(xì)胞，用GOD-POD法檢測(cè)細(xì)胞的葡萄糖攝取情況，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)抵抗素轉(zhuǎn)染后及FGF-21處理后細(xì)胞GLUT1、PPAR-γ mRNA表達(dá)的變化。利用葸酮法檢測(cè)FGF-21處理后細(xì)胞的糖原合成量變化。

4、　　 本研究成功構(gòu)建過表達(dá)抵抗素的HepG2模型細(xì)胞，GOD-POD法檢測(cè)結(jié)果顯示，模型細(xì)胞經(jīng)不同濃度胰島素刺激后，葡萄糖消耗增加比率顯著低于對(duì)照組，說明模型細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性降低，產(chǎn)生胰島素抵抗，但經(jīng)不同濃度FGF-21刺激后，模型細(xì)胞的葡萄糖消耗增加比率與對(duì)照組無差異，且葡萄糖消耗比率與FGF-21呈現(xiàn)劑量依賴關(guān)系，此結(jié)果說明FGF-21可有效調(diào)節(jié)胰島素抵抗模型細(xì)胞的葡萄糖攝取;實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，抵抗素轉(zhuǎn)染后HepG

5、2細(xì)胞GLUT1mRNA表達(dá)增加，經(jīng)FGF-21刺激后模型細(xì)胞與對(duì)照細(xì)胞相比GLUT1mRNA的表達(dá)仍有上升趨勢(shì)， PPAR-γ的變化不顯著，結(jié)果表明FGF-21能有效調(diào)節(jié)過表達(dá)抵抗素引發(fā)胰島素抵抗模型細(xì)胞GLUT1表達(dá)量，從而促進(jìn)細(xì)胞攝取葡萄糖，有效調(diào)節(jié)細(xì)胞的葡萄糖代謝;利用葸酮法檢測(cè)糖原合成量，結(jié)果表明模型細(xì)胞的糖原合成量顯著低于對(duì)照組，但經(jīng)不同濃度FGF-21刺激后，糖原合成含量提高，且與FGF-21含量成劑量依賴關(guān)系，實(shí)驗(yàn)證明F