抑制血紅素氧合酶-1對(duì)大鼠免疫性肝纖維化的影響.pdf

1、目的： 血紅素氧合酶(Heme Oxygenase，HO)是人類和哺乳動(dòng)物組織器官中廣泛存在的一種加氧酶，是催化血紅素的起始酶和限速酶，有著重要的生物學(xué)作用。HO-1是HO的一種同工酶，近年的研究證實(shí)HO-1及其酶解產(chǎn)物協(xié)同發(fā)揮著抗炎、抗氧化、抑制細(xì)胞凋亡等作用，廣泛參與心、腦、肺、肝、腎等組織細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激損傷，是機(jī)體最重要的內(nèi)源性保護(hù)體系之一。 有研究顯示，HO-1在肝移植、急性肝損傷和缺血再灌注損傷等多種肝臟損害

2、中，對(duì)肝細(xì)胞均具有保護(hù)作用。鋅原卟啉可抑制HO-1活性，限制血紅素轉(zhuǎn)化為膽綠素。本研究的目的就是通過鋅原卟啉抑制HO-1的表達(dá)，觀察肝纖維化大鼠HO-1的表達(dá)與肝臟功能及形態(tài)學(xué)變化的關(guān)系，探討HO-1對(duì)免疫性肝纖維化大鼠的肝臟是否具有保護(hù)作用，為今后的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法： 選取52只雄性SD成年大鼠，體重220～270g，隨機(jī)分為三組：正常對(duì)照組12只、肝纖維化組20只和鋅原卟啉組20只。肝纖維化組和鋅原卟啉組

3、應(yīng)用人體血清白蛋白建立免疫性肝纖維化模型，鋅原卟啉組在每次尾靜脈攻擊同時(shí)給予鋅原卟啉(5mg/kg)腹腔注射，6周后將所有大鼠處死。免疫組化和western blotting法觀察肝組織中HO-1的表達(dá)。采用全自動(dòng)生化分析儀測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanineaminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferase，AST)、白蛋白(albumin，Alb)等反映肝功能。

4、采用Y放射免疫計(jì)數(shù)器測定血清透明質(zhì)酸(Hyaluronic acid，HA)、層粘蛋白(1aminin，LN)、Ⅲ型前膠原肽(Type Ⅲ procollagen，PCIII)、Ⅳ-型膠原(Ⅳ collagen，Ⅳ-C)等反映肝纖維化程度。通過HE染色、VG染色、Foot氏網(wǎng)狀纖維染色等三種染色方法觀察肝細(xì)胞變化、炎細(xì)胞浸潤情況、匯管區(qū)、纖維間隔以外的肝細(xì)胞間梭形細(xì)胞數(shù)目、纖維組織增生程度等組織形態(tài)學(xué)改變。 結(jié)果： 1．

5、免疫組化結(jié)果提示：與正常對(duì)照組比較，肝纖維化組肝組織的HO-1表達(dá)范圍明顯擴(kuò)大，強(qiáng)度明顯加強(qiáng)；鋅原卟啉組較正常對(duì)照組HO-1表達(dá)范圍也明顯擴(kuò)大，但強(qiáng)度較肝纖維化組減弱。 2．Western blotting結(jié)果提示：與正常對(duì)照組比較，肝纖維化組肝組織的HO-1表達(dá)明顯增加(P<0.01)。應(yīng)用鋅原卟啉處理降低了肝纖維化時(shí)HO-1的表達(dá)(P<0.05)，但鋅原卟啉組仍比正常對(duì)照組高(P<0.01)。 3．肝功能指標(biāo)測定：三

6、組間Alb均無顯著性差異(P>0.05)。與正常對(duì)照組比較，肝纖維化組肝功能指標(biāo)ALT、AST均明顯升高(P<0.01)，而鋅原卟啉組高于肝纖維化組(P<0.05)。 4．肝纖維化指標(biāo)測定：與正常對(duì)照組比較，肝纖維化組均明顯升高(P<0.01)，而鋅原卟啉組均高于肝纖維化組(P<0.05)。 5．病理學(xué)檢查結(jié)果：肝纖維化組、鋅原卟啉組與正常對(duì)照組相比，細(xì)胞呈現(xiàn)一定程度的水腫變性(濁腫)，兩組均未見肝細(xì)胞壞死，但鋅原卟啉組

7、略重。鋅原卟啉組淋巴細(xì)胞浸潤明顯，肝細(xì)胞間梭形細(xì)胞數(shù)目較肝纖維化組、正常對(duì)照組明顯增多。與正常對(duì)照組相比，肝纖維化組成纖維細(xì)胞、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原增生程度明顯加重(P<0.01)。與肝纖維化組相比，鋅原卟啉組成纖維細(xì)胞、Ⅰ型膠原、Ⅲ型膠原增生程度更重，有顯著性差異(P<0.01)。 結(jié)論： 1．在免疫性肝纖維化模型中，HO-1呈高水平表達(dá)，給予抑制劑鋅原卟啉處理后，肝臟HO-1的表達(dá)降低。 2．在免疫性肝纖維化模