芹菜素抗大鼠離體心臟缺氧-復(fù)氧損傷保護作用的機制研究.pdf

1、背景和目的：
　　芹菜素（Apigenin, Api）是黃酮類化合物的一種，且已有文章報道芹菜素能夠保護心肌對抗缺血再灌注(ischemia/reperfusion, I/R)損傷。然而其抗心肌缺血再灌注損傷的機制尚不清楚。我們假設(shè)，芹菜素抗心機缺血再灌注的保護機制可能是通過B細胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2)介導(dǎo)的。本項研究通過建立大鼠離體心臟缺血再灌注模型，以芹菜素為干預(yù)條件，通過觀測各項生化指

2、標，探討芹菜素抗大鼠離體心臟缺血再灌注損傷作用機制。
　　方法：
　　250-300g健康成年SD雄性大鼠30只，隨機分成五組：對照組（Control），缺血再灌注組（Anoxia/reoxygenation, A/R），芹菜素治療組(A/R+Api)，芹菜素+ABT-737組(A/R+Api+ABT-737)， ABT-737組(A/R+ABT-737)。A/R+Api、A/R+Api+ABT-737和A/R+ABT-73

3、7組在建立離體心臟缺血再灌注模型前24h給予大鼠腹腔注射Api（2,4,8mg/kg）和/或ABT-737（20μmol/kg）,control組注射等量生理鹽水。Power Lab軟件收集離體心臟收縮壓、心率、等容收縮期左心室壓力上升/下降的最大速率（maximum rate of rise/fall of left ventricular pressure, dp/dtmax）；氯化三苯基四氮唑（Triphenyltetrazoli

4、um chloride, TTC）染色觀察梗死區(qū)域；收集灌流液用于檢測乳酸脫氫酶（Lactate dehydrogenase, LDH）和肌酸激酶（Creatine kinase, CK）水平；蛋白質(zhì)印跡法（Western blotting）檢測心肌Bcl-2、細胞凋亡蛋白酶-3（caspase-3）、線粒體和胞漿細胞色素C（cytochrome c， cyt-c）表達水平；末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP缺口末端標記測定法[Term

5、inal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL]觀察細胞凋亡水平。
　　結(jié)果：
　?、倥c對照組相比，A/R組大鼠離體心臟灌流液中LDH和CK濃度顯著增加（p<0.01），與A/R相比芹菜素干預(yù)組大鼠離體心臟灌流液中LDH和CK濃度顯著降低（p<0.01）且在芹菜素劑量為4 mg/kg時效果最佳，但在抑制劑干預(yù)組，芹菜素的

6、這種影響被減弱（p<0.05）；②與對照組相比，A/R組大鼠離體心臟在復(fù)氧時心率、LVDP和+dp/dt max顯著降低（p<0.01），-dp/dt max顯著增加（p<0.05），與A/R組相比，芹菜素組可顯著改善上述各項心功能指標（p<0.05），但是這種影響在抑制劑干預(yù)組顯著減弱（p<0.05）；③與對照組相比，A/R后大鼠離體心臟梗死面積顯著增大（p<0.01），芹菜素干預(yù)組可顯著減少A/R所致梗死面積（p<0.05），與芹菜

7、素干預(yù)組相比，抑制劑干預(yù)組可顯著抵消芹菜素減少梗死面積的影響（p<0.05）；④與對照組相比，A/R后大鼠離體心臟心肌組織中Bcl-2的蛋白表達量下調(diào)（p<0.01），而芹菜素干預(yù)組可顯著上調(diào)A/R誘導(dǎo)的Bcl-2蛋白表達下調(diào)（p<0.05），但與芹菜素干預(yù)組相比，抑制劑干預(yù)組Bcl-2蛋白表達量上調(diào)（p<0.05）；⑤與對照組相比，A/R組大鼠離體心臟心肌組織中細胞凋亡蛋白酶-3活性及總細胞凋亡蛋白酶-3表達量顯著降低，斷裂細胞凋亡蛋

8、白酶-3表達量顯著增加，而芹菜素干預(yù)組大鼠離體心臟心肌組織中細胞凋亡蛋白酶-3活性及總細胞凋亡蛋白酶-3表達量顯著升高，斷裂細胞凋亡蛋白酶-3表達量顯著降低（ p<0.05 VS A/R group）,而ABT-737可顯著抑制芹菜素的這種影響（p<0.05）;⑥與對照組相比，A/R組大鼠離體心臟心肌細胞線粒體中細胞色素c表達顯著下調(diào)，胞漿中細胞色素c表達量顯著上調(diào)（p<0.05），而芹菜素干預(yù)組可顯著減少A/R誘導(dǎo)胞漿細胞色素c的大量

9、釋放（p<0.05），但是芹菜素的這種作用可被ABT-737顯著抑制（p<0.05）；⑦與對照組相比，A/R組大鼠離體心臟心肌細胞凋亡數(shù)量顯著增加（p<0.01），而芹菜素干預(yù)組大鼠離體心臟心肌細胞凋亡數(shù)量顯著降低（p<0.05 VS A/R group）,但是ABT-737可顯著抑制芹菜素抑制細胞凋亡的影響（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、芹菜素預(yù)處理對大鼠離體心臟A/R損傷有一定保護作用；
　　2、芹菜素抗大