血府逐瘀膠囊調(diào)控EphB4-EphrinB2促血管新生的作用研究.pdf

1、目的：
　　 通過比較不同藥物濃度和時(shí)間作用條件下，血府逐瘀膠囊對(duì)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)參與血管新生的功能影響，從細(xì)胞水平驗(yàn)證血府逐瘀膠囊促血管新生的作用，同時(shí)選擇藥物促血管新生的最佳濃度及作用時(shí)間點(diǎn)，在此基礎(chǔ)上分析血府逐瘀膠囊對(duì)EphB4/EphrinB2表達(dá)的影響，為下一步闡明血府逐瘀膠囊調(diào)控EphB4/EphrinB2雙向通路促血管適度生長(zhǎng)的作用機(jī)制奠定前期工作基礎(chǔ)，也為血府逐瘀膠囊的臨床應(yīng)用提供現(xiàn)代的科學(xué)理論依

2、據(jù)。
　　 方法：
　　 將常規(guī)培養(yǎng)的人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)隨機(jī)分為空白血清對(duì)照組和含藥血清干預(yù)組，人血清含量為1.25％、2.5％、5％，誘導(dǎo)處理時(shí)間為24h、48h、72h。利用MTT比色法和流式細(xì)胞周期測(cè)定法、Transwell遷移小室、黏附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)和體外成血管實(shí)驗(yàn)分別觀察各組血清對(duì)HMEC-1的增殖能力、遷移能力、黏附能力和體外成血管能力的影響。利用實(shí)時(shí)定量PCR和免疫印跡技術(shù)對(duì)EphB4和Ephr

3、inB2的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)。
　　 結(jié)果：
　　 1、對(duì)細(xì)胞活性的影響方面，在三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)，三個(gè)濃度的血府逐瘀膠囊含藥血清組與同等血清含量的空白血清組比較，OD值均無(wú)差異。
　　 2、對(duì)細(xì)胞增殖的影響方面，在三個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)，三個(gè)濃度的血府逐瘀膠囊含藥血清組與同等血清含量的空白血清組比較，S期細(xì)胞比例均無(wú)差異。
　　 3、對(duì)細(xì)胞遷移的影響方面，與同等血清量的空白對(duì)照組相比，1.25％濃度的含藥血清組，在3個(gè)作

4、用時(shí)間點(diǎn)上，細(xì)胞遷移數(shù)均明顯增加;2.5％濃度的含藥血清組，在24h作用時(shí)間點(diǎn)上，細(xì)胞遷移數(shù)明顯減少，在48h、72h作用時(shí)間點(diǎn)上，細(xì)胞遷移數(shù)均明顯增加;5％濃度的含藥血清組，在24h作用時(shí)間點(diǎn)上，細(xì)胞遷移數(shù)均明顯增加，在48h、72h作用時(shí)間點(diǎn)上，細(xì)胞遷移數(shù)均明顯減少。
　　 4、對(duì)細(xì)胞黏附的影響方面，與同等血清量的空白對(duì)照組相比，1.25％濃度含藥血清組在前2個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞黏附數(shù)無(wú)差異，僅在72h時(shí)細(xì)胞黏附數(shù)明顯減少;2.

5、5％濃度含藥血清組在前2個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞黏附數(shù)均顯著增加，在72h時(shí)無(wú)差異;5％含藥血清組細(xì)胞黏附數(shù)在24h時(shí)明顯減少，至48h時(shí)增加，72h時(shí)無(wú)差異。
　　 5、對(duì)促血管管腔形成方面，與同等血清含量空白對(duì)照組比較，1.25％含藥血清組的血管管腔數(shù)在3個(gè)作用時(shí)間點(diǎn)上均無(wú)差異;2.5％含藥血清組的血管管腔數(shù)只有在48h時(shí)顯著增加，在其它2個(gè)時(shí)間點(diǎn)上無(wú)差異;在24h時(shí)5％含藥血清組血管管腔數(shù)無(wú)差異，在48h、72h時(shí)間點(diǎn)上均顯著減少

6、。
　　 6、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導(dǎo)細(xì)胞6h、48h對(duì)EphB4基因表達(dá)量均沒有影響，在誘導(dǎo)12h后，EphB4基因的表達(dá)上調(diào)，隨后在24h時(shí)，EphB4基因的表達(dá)量明顯下調(diào)。
　　 7、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導(dǎo)細(xì)胞6h、12h、24h、48h對(duì)EphrinB2基因表達(dá)量均沒有影響。
　　 8、與2.5％空白血清組比較，2.5％含藥血清誘導(dǎo)細(xì)胞12h、48h時(shí)，對(duì)Ep

7、hrinB2蛋白表達(dá)無(wú)影響，在24h作用時(shí)間點(diǎn)使EphrinB2蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。
　　 結(jié)論：
　　 1、血府逐瘀膠囊具有顯著的促血管新生作用，其促血管新生作用存在最佳藥物作用時(shí)間點(diǎn)和最適宜濃度。藥物作用機(jī)制與其促細(xì)胞遷移、黏附和體外成血管等環(huán)節(jié)相關(guān)。
　　 2、血府逐瘀膠囊低濃度促進(jìn)、高濃度抑制的雙向調(diào)控作用和短暫性的促血管新生功效可以調(diào)控血管適度生長(zhǎng)。
　　 3、血府逐瘀膠囊調(diào)控血管生長(zhǎng)與其調(diào)控Ep