miRNAs、MTHFR基因多態(tài)性與中國漢族人群缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、本文對miRNAs、MTHFR基因多態(tài)性與中國漢族人群缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)性進行了研究。本研究分為兩個部分：
　　第一部分：miRNAs、MTHFR基因多態(tài)性與中國漢族人群缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)研究。
　　目的：缺血性腦卒中（Ischemic stroke，IS）是一類由基因和環(huán)境因素共同作用而導(dǎo)致的復(fù)雜性疾病。MicroRNAs(miRNAs)和亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydro-folate redu

2、ctase，MTHFR)在缺血性腦卒中的發(fā)生和發(fā)展中起到重要作用。MicroRNAs和MTHFR基因單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs)與人類很多疾病易感性有關(guān)。近年的研究表明，miR-146a C>G（rs2910164）、miR-196a2 T>C（rs11614913）、miR-499 A>G（rs3746444）和miR-149T>C（rs2292832）已經(jīng)被發(fā)現(xiàn)與多種疾病

3、發(fā)病易感性有關(guān)；然而，它們對缺血性腦卒中發(fā)病易感性影響的研究報道很少，與亞型關(guān)聯(lián)研究更少，且結(jié)果不一。MTHFR3’-非翻譯區(qū)（3’-untranslated region,3’-UTR）SNPs能夠改變基因表達，影響與miRNAs結(jié)合，增加疾病發(fā)生風(fēng)險，而其3’-UTR（rs4846049) G>T多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)及其與miRNAs基因-基因交互作用，目前尚未檢索到相關(guān)報道。本研究探討miRNAs、MTHFR基因多態(tài)性與中國

4、漢族人群缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)性。
　　方法：本研究采用病例-對照設(shè)計，隨機選取符合研究標準的396名缺血性腦卒中病人為病例組，對照組為378名健康人群。按照TOAST分型標準分為：大動脈粥樣硬化型(1arge artery atherosclerosis，LAA)和小動脈閉塞型(small artery occlusion，SAO)，進行亞組分析。采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性（Polymerase chain reacti

5、on-Restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)和直接測序法對miR-146a C>G（rs2910164）、miR-196a2 T>C（rs11614913）、miR-499A>G(rs3746444)、miR-149T>C(rs2292832)和MTHFRG>T（rs4846049）五個SNPs在病例組及對照組進行基因分型分析。采用擬合優(yōu)度卡方檢驗分析Hardy-Weinbe

6、rg遺傳平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）；采用logistic回歸模型分析SNPS及其與傳統(tǒng)危險因素（吸煙、飲酒、糖尿病、高血壓?。┙换プ饔脤θ毖阅X卒中的影響；采用多因子降維法（multifactor dimensionality reduction，MDR）分析基因-基因交互作用對缺血性腦卒中的影響；采用廣義線性模型分析與缺血性腦卒中相關(guān)SNPs對血脂的影響。
　　結(jié)果：⑴所有研究對象每個S

7、NP位點基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P＞0.05），表示所選取樣本具有人群代表性，適合行遺傳學(xué)分析。⑵miR-146 a C>G(rs2910164) GG基因型可顯著增加缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險（OR=1.86,95％ CI:1.19-2.88,P=0.006）；顯性模型示：CG+GG基因型較CC基因型可增加39%的發(fā)病風(fēng)險（OR=1.39,95% CI:1.04-1.86,P=0.027）；隱性模型示：GG基因型較

8、CC+CG基因型可增加62%的發(fā)病風(fēng)險（OR=1.62,95% CI:1.08-2.42,P=0.020）；加性模型示：每增加1個G等位基因，其發(fā)病風(fēng)險增加34%（OR=1.34,95% CI:1.09-1.65,P=0.006）；與C等位基因相比，G等位基因可顯著增加缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險（OR=1.33,95% CI:1.09-1.64,P=0.006）。亞組分析示，rs2910164 C>G可顯著增加LAA型發(fā)病風(fēng)險（P＜0.05)

9、，僅在校正傳統(tǒng)危險因素后，GG基因型可增加SAO型發(fā)病風(fēng)險（P＜0.05)。⑶miR-149 T>C（rs2292832）CC基因型可顯著增加缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險（OR=2.00,95% CI:1.22-3.28,P=0.006）；顯性模型示：TC+CC基因型較TT基因型可顯著增加42%的發(fā)病風(fēng)險（OR=1.42,95% CI:1.07-1.88,P=0.017）；隱性模型示：CC基因型較TT+TC基因型可增加75%的發(fā)病風(fēng)險（OR=

10、1.75,95% CI:1.09-2.82,P=0.020）；加性模型示：每增加1個C等位基因，其發(fā)病風(fēng)險增加37%（OR=1.37,95% CI:1.11-1.7,P=0.004）；與T等位基因相比，C等位基因可顯著增加缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險（OR=1.37,95% CI:1.11-1.7，P=0.004）。亞組分析示，rs2292832 T>C可顯著增加LAA型發(fā)病風(fēng)險（P＜0.05)，未發(fā)現(xiàn)與SAO型發(fā)病風(fēng)險顯著相關(guān)性（P>0.05

11、）。⑷MTHFR G>T（rs4846049）TT基因型可顯著增加缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險（OR=2.87,95% CI:1.43-5.76,P=0.003）；顯性模型示：GT+TT基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險是GG基因型的1.71倍（OR=1.71,95% CI:1.28-2.28,P<0.001）；隱性模型示：TT基因型攜帶者發(fā)病風(fēng)險是GG+GT基因型的2.41倍（OR=2.41,95% CI:1.21-4.8,P=0.012）；加性模型示：每

12、增加一個T等位基因，其發(fā)病風(fēng)險增加63%（OR=1.63,95% CI:1.28-2.08,P<0.001）；與G等位基因相比，T等位基因可顯著其發(fā)病風(fēng)險（OR=1.62,95% CI:1.28-2.06,P<0.001）。亞組分析示，rs4846049 G>T可顯著增加LAA型發(fā)病風(fēng)險（P＜0.05)；也可增加SAO型發(fā)病風(fēng)險（P＜0.05)，但校正傳統(tǒng)危險因素后,未達到顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。⑸未發(fā)現(xiàn)miR-196a2 T>

13、C(rs11614913)和miR-499 A>G(rs3746444)多態(tài)性與缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險有顯著相關(guān)性（P>0.05）；亞組分析也未發(fā)現(xiàn)兩基因位點多態(tài)性與LAA型和SAO型缺血性腦卒中的發(fā)病風(fēng)險有顯著關(guān)聯(lián)性（P>0.05）。⑹未發(fā)現(xiàn)miR-146a C>G(rs2910164)、miR-149 T>C(rs2292832)和MTHFRG>T(rs4846049)與吸煙、飲酒、高血壓病、糖尿病危險因素交互作用有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P

14、>0.05）。⑺miR-196a2 T>C（rs11614913）、miR-499 A>G（rs3746444）和MTHFRG>T（rs4846049）有基因-基因交互作用（P＜0.05)。⑻miR-149 T>C(rs2292832)和MTHFRG>T（rs4846049）與總膽固醇水平升高顯著相關(guān)（P＜0.05)，未發(fā)現(xiàn)miR-146a C>G(rs2910164)多態(tài)性位點與血脂水平有顯著關(guān)聯(lián)性（P>0.05）。
　　結(jié)論：

15、①miR-146aC>G（rs2910164）和miR-149 T>C(rs2292832)多態(tài)性可能與中國漢族人群缺血性腦卒中發(fā)病易感性增加有關(guān)；其多態(tài)性可能主要增加LAA型缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險。②發(fā)現(xiàn)MTHFR G>T（rs4846049）多態(tài)性可能與中國漢族人群缺血性腦卒中發(fā)病易感性增加有關(guān)，可能主要增加LAA型缺血性腦卒中發(fā)病易感性。③miR-196a2T>C(rs11614913)和miR-499 A>G(rs3746444)

16、多態(tài)性可能與中國漢族人群缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險無相關(guān)性。④miR-146a C>G(rs2910164)、miR-149T>C(rs2292832)和MTHFRG>T(rs4846049)多態(tài)性影響中國人群缺血性腦卒中的發(fā)病易感性，可能不是通過與吸煙、飲酒、高血壓病、糖尿病存在交互作用所致。⑤miR-196a2 T>C（rs11614913）、miR-499 A>G（rs3746444）和MTHFRG>T（rs4846049）之間可能存在

17、基因-基因交互作用，影響中國漢族人群缺血性腦卒中的發(fā)病易感性。⑥miR-149 T>C(rs2292832)和MTHFRG>T（rs4846049）多態(tài)性增加中國漢族人群缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險，可能與影響血脂代謝水平有關(guān)。
　　第二部分：MTHFR基因 C677T多態(tài)性與中國人群缺血性腦卒中風(fēng)險：匯總分析。
　　目的：亞甲基四氫葉酸還原酶（methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）基因

18、C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中之間的關(guān)系已被廣泛研究；然而，在不同的人群中結(jié)果是不一致的，特別是在中國人群中。綜合評價MTHFR基因C677T多態(tài)性與缺血性腦卒中之間關(guān)聯(lián)性是非常有必要的。因此，我們的研究目的是進一步去評估MTHFR基因C677T多態(tài)性與中國人群缺血性腦卒中發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)性。
　　方法：從Pubmed、OVID、Embase、萬方數(shù)據(jù)庫、中國期刊全文數(shù)據(jù)庫（CNKI）、重慶維普數(shù)據(jù)庫（VIP）和中國生物醫(yī)學(xué)文獻數(shù)據(jù)

19、庫(CBM)，收集了所有截至到2014年8月的相關(guān)研究。匯總分析采用Stata12.0統(tǒng)計軟件,利用OR及其95% CI評價基因多態(tài)性與缺血性腦卒中的關(guān)聯(lián)強度,采用Q-檢驗和I2檢驗評價各文獻之間異質(zhì)性。采用不同的基因效應(yīng)模型、亞組分析、發(fā)表偏倚和敏感性分析，來提高分析結(jié)果的可靠性。
　　結(jié)果：匯總分析結(jié)果顯示，MTHFR基因C677T多態(tài)性在總?cè)巳毫鶄€基因模型均存在顯著關(guān)聯(lián)性(加性模型: OR=1.34,95% CI:1.17-

20、1.54,P<0.001;顯性模型: OR=1.44,95% CI:1.26-1.64,P<0.001；隱性模型: OR=1.45,95% CI:1.15-1.83,P=0.001；雜合子模型：OR=1.35,95%CI:1.18-1.55,P<0.001；純合子模型: OR=1.80,95% CI:1.34-2.41,P<0.001；等位基因模型:OR=1.34,95% CI:1.17-1.53,P<0.001)；亞組分析中也得到同樣