枸杞中抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶有效成分的篩選.pdf

1、高血壓是一種常見病、多發(fā)病，具有“三高三低”的特點，即高發(fā)病率、高致殘率、高死亡率;低知曉率、低服藥率、低控制率。因此，如何針對高血壓的特點有效的控制高血壓已經(jīng)成為醫(yī)學界關(guān)注的焦點。目前市場上主要的的降血壓藥物大多是合成藥物，雖然療效比較好，但是基本上都有作用時間短、依賴性較強、毒副作用大等問題。我國中藥資源豐富，且有悠久的用藥歷史，藥物藥效穩(wěn)定、安全。因此，尋找有效降血壓的中藥以及開發(fā)降血壓的中藥產(chǎn)品具有重要的現(xiàn)實意義。現(xiàn)代醫(yī)學證明，

2、構(gòu)杞具有降血壓、降血糖、調(diào)節(jié)免疫、抗疲勞、抗癌、抗氧化等多種生物活性。然而，枸杞降血壓的機制和有效成分尚不明朗，因此有必要對枸杞中降血壓的活性成分做全面、深入的研究。本研究用血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)模型為手段，對枸杞的降壓活性做全面評價，利用高速逆流色譜(HSCCC)對枸杞中的活性成分進行制備型分離。期望能夠獲得枸杞中具有降血壓的單體成分，為下一步藥理研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究的主要內(nèi)容有:(1)ACE粗酶的提取以及用高效液

3、相色譜法(HPLC)測定ACE的活性;(2)以ACE為靶標，評價32味中藥對ACE抑制作用的活性;(3)采用D-101大孔樹脂對枸杞的乙醇提取物進行粗分，同時以ACE追蹤大孔樹脂的活性部位;(4)采用硅膠柱層析和凝膠柱層析對大孔樹脂中活性最高的部位進行分離純化并以ACE為靶標進行活性部位及活性成分的追蹤;(5)采用D-101大孔樹脂對枸杞的乙醇提取物進行除雜和粗分后，用HSCCC以氯仿-甲醇-水(10∶7∶3，v/v/v)為溶劑體系，對

4、枸杞中的莨菪亭進行了制備型分離。
　　 通過以上實驗得到結(jié)果如下:
　　 (1)用梯度冷凍離心法從新鮮兔肺中提取得到ACE粗酶，其活性較高。用底物馬尿酰-組氨酰-亮氨酸(HHL)-ACE為反應體系，HPLC法測定反應體系中馬尿酸(Hip)含量，Hip的峰面積與ACE濃度呈很好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r2=0.99，說明此法可以精確檢測ACE的活性，能夠反映酶與底物的反應程度，從而確定酶的合適劑量。
　　 (2)對32

5、味中藥進行ACE的活性評價，實驗結(jié)果顯示:32味藥材中，澤瀉、決明子、知母、山楂、五味子、黃芪、佛手、枸杞對ACE的抑制率都高于60％，其中枸杞的抑制率最高，達到92.30％，說明枸杞中含有能有效抑制ACE的活性成分。因此，選取枸杞進行下一步的研究。
　　 (3)用D-101大孔樹脂對枸杞乙醇提取物粗分，得到6個部位，實驗結(jié)果顯示:50％的乙醇洗脫部位活性最高，抑制率達到35.46％。
　　 (4)用柱層析方法分離活性部

6、位中的有效成分，硅膠柱層析粗分得到7個洗脫部位，其中乙酸乙酯-甲醇(6∶4)洗脫部位活性最高，抑制率達到56.26％。用硅膠柱層析和和凝膠柱層析進行再次分離，得到6個化合物，其中莨菪亭糖苷類這個化合物活性最高，抑制率達到96.67％，初步認定枸杞中抑制ACE的活性物質(zhì)為莨菪亭糖苷類化合物。
　　 (5)用高速逆流色譜法對枸杞的乙醇提取物中的大孔樹脂50％乙醇洗脫部分進行了分離，經(jīng)薄層色譜-熒光分析法篩選高速逆流色譜的溶劑體系。用