DNA條形碼試劑盒在疫霉屬和腥黑粉菌屬檢測中的應(yīng)用及風(fēng)險分析.pdf

1、疫霉屬(Phytophthora sp.)和腥黑粉菌屬(Tilletia sp.)是日常檢疫工作中的重點關(guān)注對象，疫霉屬是包括大豆、馬鈴薯等在內(nèi)多種作物的病原真菌，嚴重危害寄主植物的生長;腥黑粉菌屬主要危害小麥等禾本科作物，造成嚴重的經(jīng)濟損失。本文通過對這兩個屬內(nèi)較為重要的病原菌進行風(fēng)險分析，旨在進一步了解進境植物攜帶疫霉屬和腥黑粉菌屬病原真菌的情況及其傳入風(fēng)險，明確該屬下病原真菌的風(fēng)險等級，并提出相應(yīng)的風(fēng)險管理措施，為今后更好的開展檢

2、驗檢疫工作提供參考。根據(jù)風(fēng)險分析結(jié)果得出，疫霉屬中有7種高風(fēng)險檢疫性有害生物，分別為:栗黑水疫霉(P.cambivora)、馬鈴薯疫霉緋腐病菌(P.erythroseptica)、大豆疫霉（P.sojae）、丁香疫霉（P.syringae）、冬生疫霉（P.hibernalis）、苜蓿疫霉（P.medicaginis)、多枝疫霉（P.ramorum）;腥黑粉菌屬中有3種高風(fēng)險檢疫性有害生物，分別為:小麥印度腥黑粉菌（T.indica）、小

3、麥矮腥黑粉菌（T.controversa）、黑麥草腥黑粉菌（T.walkeri）。建議在進境植物檢疫過程中應(yīng)重點予以關(guān)注，特別是T.walkeri目前尚未列入我國進境植物檢疫性有害生物名錄，但通過風(fēng)險分析我們得出，該病原菌的進入風(fēng)險較高，定殖擴散可能性大，且經(jīng)濟危害嚴重，因此建議將其增列為我國進境植物檢疫性有害生物。
　　鑒于疫霉屬和腥黑粉菌屬的病原真菌存在種間形態(tài)極為類似，對檢疫人員經(jīng)驗要求較高的特點，本文對上述2個屬較為重要的

4、病原種進行了基因條碼檢測技術(shù)的研究。DNA條形碼試劑盒具有操作簡便、結(jié)果可靠、不依賴檢疫人員的經(jīng)驗技術(shù)等優(yōu)點，同時可以實現(xiàn)對近似種的有效區(qū)分。本研究中，我們嘗試將DNA條形碼試劑盒技術(shù)用于疫霉屬和腥黑粉菌屬的檢測，通過自行研發(fā)的疫霉屬DNA條形碼試劑盒（疫霉屬基因條碼檢測網(wǎng)站,http://58.211.92.14:8080/myapp）、腥黑粉菌屬DNA條形碼試劑盒（植物有害生物檢疫鑒定系統(tǒng)，http://58.211.92.14/s

5、ysinspect/kj.aspx）實現(xiàn)對這兩個屬內(nèi)病原真菌的快速、準(zhǔn)確的鑒定，有效解決對于實際工作中難以鑒定到種的問題。試劑盒以網(wǎng)站形式呈現(xiàn)，方便使用者的實際應(yīng)用。實驗結(jié)果表明，疫霉屬基因條碼試劑盒主要涉及疫霉屬真菌的ITS、28S、60S、COX2四個基因片段，并相對應(yīng)有用于疫霉屬真菌DNA擴增的引物、PCR反應(yīng)體系和條件。通過我們自行研發(fā)的分析軟件，共找到特異性堿基位點238個，其中ITS片段86個，分屬8個種;60S片段42個，

6、分屬13個種;28S片段44個，分屬12個種;COX2片段66個，分屬13個種。除掘氏疫霉（P.drechsleri）外，其它種均能找到不同數(shù)量的特異性堿基位點，可以基本實現(xiàn)對疫霉屬中重要種的有效區(qū)分和鑒定。腥黑粉菌屬DNA條形碼試劑盒由于基因序列有限，目前主要嘗試了ITS片段，通過自行研發(fā)的分析軟件，共找到67個特異性堿基位點，包含6個種。通過條形碼試劑盒僅可實現(xiàn)對部分種的區(qū)分，建議隨著研究的不斷發(fā)展，可以嘗試在其他基因片段上尋找更多