伯克氏菌屬植物病原菌DNA條形碼檢測技術(shù)研究.pdf

1、植物病原細菌是一類非常重要的植物病原菌，目前已經(jīng)描述的植物病原細菌大約有30多個屬、650個種。大多數(shù)細菌會引起多種農(nóng)作物、經(jīng)濟作物以及花卉上的病害，造成嚴重的經(jīng)濟損失。伯克氏菌屬(Burkholderia)是一類重要的植物病原細菌，包括了8種不同植物病原菌，均會引起植物不同的病害癥狀，包括腐爛、枯萎和嚴重壞死等。因此，如何利用簡便、高效的檢測手段將病原菌檢測出來顯得尤為重要。DNA條形碼技術(shù)突破了傳統(tǒng)分類方法對模式標本與分類經(jīng)驗的過度

2、依賴，在鑒定過程中容易實現(xiàn)自動化和標準化，具有檢測過程快速、準確、高通量等優(yōu)點，有效地滿足了口岸檢疫對現(xiàn)代檢測技術(shù)的要求，是傳統(tǒng)檢測鑒定方法的一個良好補充。
　　鑒于此，我們分別從NCPPB菌種庫、農(nóng)業(yè)微生物保存中心及中科院微生物所購得共72株伯克氏菌屬的菌株，對伯克氏菌屬的6條候選DNA條形碼基因進行PCR擴增測序，并從擴增效果，測序成功率，種內(nèi)、種間遺傳距離，Barcoding gap及NJ樹幾個方面進行比較分析。結(jié)果表明rp

3、oD基因最適合進行該屬內(nèi)種及致病變種的區(qū)分，gyrB基因可作為該屬分類鑒定的有效補充。
　　本文中所涉伯克氏菌屬的三個種及致病變種均被列入《中華人民共和國進境植物檢疫性有害生物名錄》。這些檢疫性細菌一旦未能高效檢出，使其流入國門、傳播蔓延以至于在我國大面積發(fā)生，必將給我國的蔬菜、糧食生產(chǎn)、生態(tài)環(huán)境安全以及貨物的自由貿(mào)易等構(gòu)成嚴重威脅。
　　在進境截獲的萬代蘭植株中，發(fā)現(xiàn)葉片上有局部黑褐色病斑，進而葉片失綠、變黃，然后葉落。為

4、確定導致葉片局部黑褐色病斑、黃變的病原，首先采樣分離病菌，后通過形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生理生化鑒定、致病性測定以及Biolog鑒定等方法，對病原菌進行了分離、鑒定和生物學研究，結(jié)果確定該致病菌為B.gladioli。為了進一步確定該病原菌的致病變種，我們利用前文所總結(jié)出的適用于鑒定伯克氏菌屬的幾個條形碼基因?qū)┰嚲赀M行PCR擴增測序并建立NJ樹進行分析比較，發(fā)現(xiàn)該病原菌與B.gladioli現(xiàn)有的三種致病變種的距離都相對較遠，在種內(nèi)單獨