大白菜根腫病病原菌檢測(cè)與防治技術(shù)研究.pdf

1、根腫病造成世界范圍內(nèi)十字花科蔬菜巨大的經(jīng)濟(jì)損失。常年連作使土壤中根腫菌（Plasmodiophorabrassicae）休眠孢子的數(shù)量急劇上升，控制根腫病的困難度逐漸增加。因此急需建立一套切實(shí)可行的根腫菌檢測(cè)與防治綜合策略保證抗性品種的應(yīng)用。本文主要研究結(jié)果如下：
　　 1.研究建立了一套簡(jiǎn)便、穩(wěn)定的白菜根腫病接種體系。試驗(yàn)分別研究比較不同育苗方式、培養(yǎng)體系pH環(huán)境、接種方法及接種濃度對(duì)根腫菌接種程度的影響，認(rèn)為移栽的植株在酸性

2、環(huán)境下，采用高濃度密封菌土法接種根腫菌的方法效果最好。
　　 2.建立了nested-PCR方法用于土壤中根腫菌的快速檢測(cè)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)了根腫菌的特異性引物，對(duì)不同發(fā)病程度的土壤和白菜根進(jìn)行nested-PCR擴(kuò)增，建立了一種快速檢測(cè)根腫菌的方法。結(jié)果顯示引物對(duì)GZ10/GZ11、GZ12/GZ13和nested-PCR引物只在根腫菌中分別擴(kuò)增出574bp、277bp和277bp的特異性片段，在健康植株和其他菌種中不出現(xiàn)特異性擴(kuò)增片

3、段。用兩對(duì)引物進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增，檢測(cè)根腫菌的靈敏度為217ng·L-1和2.17μg·L-1；而nested-PCR的靈敏度可達(dá)到217pg·L-1。Nested-PCR對(duì)帶菌土壤的檢測(cè)靈敏度達(dá)到病情指數(shù)高于11.67的樣品。
　　 3.構(gòu)建了比巢式PCR更為靈敏的熒光定量PCR檢測(cè)體系，能夠定量檢測(cè)人工接種及田間的土壤樣品。本文設(shè)計(jì)適合熒光定量PCR的特異性引物對(duì)GZ12/GZ13，構(gòu)建了根腫菌的目的表達(dá)載體，用大腸桿菌表達(dá)

4、系統(tǒng)進(jìn)行表達(dá)，獲得轉(zhuǎn)化質(zhì)粒，用質(zhì)粒梯度稀釋法建立了熒光定量標(biāo)準(zhǔn)曲線。對(duì)梯度稀釋的接種土壤進(jìn)行閾值檢測(cè)，熒光定量PCR技術(shù)可以定量評(píng)估到全部接種土壤樣品。接種濃度為0.0002g感病病根/g滅菌土的土樣在接種試驗(yàn)中不表現(xiàn)發(fā)病癥狀。而熒光定量PCR仍然可以定量檢測(cè)到土樣的含菌量為5.66×104個(gè)休眠孢子/g土樣。應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)16份田間取樣進(jìn)行定量檢測(cè)，除13號(hào)和16號(hào)未發(fā)病田塊及陰性對(duì)照外，均定量到土壤的含菌量，定量檢測(cè)結(jié)果與

5、土樣病狀描述相符。
　　 4.篩選到了兩個(gè)白菜根腫病的高抗性品種。對(duì)73個(gè)白菜品種進(jìn)行了根腫病抗性品種活體篩選，獲得了兩個(gè)高抗性的白菜品種（奈斯高和金錦2號(hào)）?？勺鳛榭垢[病的品種應(yīng)用。
　　 5.篩選到一種防治根腫病的高效藥劑。試驗(yàn)分別采用拌藥法和灌藥法，比較了10種供試藥劑對(duì)白菜根腫病的溫室防治效果，并對(duì)盆栽試驗(yàn)防效較好的3種藥劑進(jìn)行了田間藥效試驗(yàn)。結(jié)果表明，50％氟啶胺懸浮劑（2g/m3）拌藥處理的防效在80％以上