基于線粒體COI基因蚊類(lèi)庫(kù)蚊DNA條形碼技術(shù)研究.pdf

1、庫(kù)蚊屬（Culex）隸屬于昆蟲(chóng)綱(Insecta)、雙翅目(Diptera)、蚊科(Culicidae)、庫(kù)蚊亞科(Culicinae)，其分布廣泛。目前為止，我國(guó)已報(bào)道該屬9亞屬計(jì)82種，其中很多種類(lèi)均是重要媒介昆蟲(chóng)。為了能更好地掌握和防治蚊媒傳染病，準(zhǔn)確鑒定媒介蚊類(lèi)蚊種是很有必要的。目前，形態(tài)特征鑒定是常用的經(jīng)典方法，但因媒介蚊類(lèi)鑒定特征細(xì)微，容易受形態(tài)完整性影響，形態(tài)學(xué)分類(lèi)方法有時(shí)候存在某方面的局限性，另外在近緣種的鑒定上對(duì)于專(zhuān)業(yè)

2、積累的要求更為苛刻。因此急需一種快速、精確、可自動(dòng)化的以及全球通用的分類(lèi)鑒定工具。線粒體細(xì)胞色素C氧化酶Ⅰ亞基( mtDNA COI)基因是目前基因庫(kù)中數(shù)據(jù)最多的片段，結(jié)構(gòu)與進(jìn)化動(dòng)力學(xué)研究比較清楚的基因之一，其結(jié)構(gòu)相對(duì)保守，種間變異較大，能夠提供豐富的系統(tǒng)發(fā)育信息?；诰€粒體COI基因的DNA條形碼技術(shù)可以快速完成物種的鑒定。
　　本研究從已經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)鑒定的庫(kù)蚊屬成蚊標(biāo)本中選取22種蚊，依據(jù)采集情況每種1-8只個(gè)體，共73只蚊蟲(chóng)進(jìn)

3、行其線粒體DNA基因組的提取，并對(duì)mtDNA COI基因進(jìn)行序列擴(kuò)增、克隆和測(cè)序。通過(guò)Blast分析，獲得73條COI序列，并對(duì)序列特征進(jìn)行分析。經(jīng)過(guò)分子分類(lèi)鑒定和類(lèi)群推測(cè)后，從中選出其中的22條有特異性差異的序列，并結(jié)合GenBank中庫(kù)蚊屬已有的16種蚊蟲(chóng)的COI序列，以Chironomus nepeanensis為外群，應(yīng)用MEGA5.1軟件，對(duì)38條COI序列系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的構(gòu)建。系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)的重建釆用NJ法，并依據(jù)重建的NJ樹(shù)分析中

4、國(guó)庫(kù)蚊屬蚊蟲(chóng)間的分類(lèi)地位和系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系。以mtDNA COI基因作為DNA條形碼的編碼基因，探討其作為庫(kù)蚊屬蚊蟲(chóng)鑒定的可行性。
　　本研究得到以下結(jié)果：
　?。?）mtDNA COI基因在堿基組成、密碼子使用和氨基酸組成具有一定的偏向性。
　?。?）100％蚊蟲(chóng)COI基因的種內(nèi)距離均小于2%，除部分蚊種外，蚊蟲(chóng)種間距離大于2%。
　?。?）COI分子數(shù)據(jù)提示：庫(kù)蚊屬中兇小庫(kù)蚊可能存在隱藏種。庫(kù)蚊屬中的包蚊亞屬蚊種

5、兇小庫(kù)蚊被聚類(lèi)于庫(kù)蚊亞屬內(nèi)。小斑翅庫(kù)蚊和類(lèi)斑翅庫(kù)蚊可能是東方庫(kù)蚊的同物異名。
　?。?）依據(jù)mtDNA COI基因的分子標(biāo)記數(shù)據(jù)，對(duì)已經(jīng)進(jìn)行形態(tài)鑒定的庫(kù)蚊屬蚊蟲(chóng)進(jìn)行分子鑒定，通過(guò)序列差異分析與親緣關(guān)系的分析，73只形態(tài)鑒定的成蚊和分子鑒定的結(jié)果基本一致。
　?。?）基于mtDNA COI基因序列重建了我國(guó)庫(kù)蚊屬38個(gè)種類(lèi)的系統(tǒng)發(fā)生樹(shù)。支序樹(shù)分析結(jié)果顯示：8亞屬均能較好區(qū)分出，庫(kù)蚊亞屬中尖音庫(kù)蚊系與海濱庫(kù)蚊系聚為一支，除包蚊亞