肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制在支氣管肺發(fā)育不良中的作用研究.pdf

1、第一部分：高氧及TGF-β1對(duì)肺泡Ⅱ型細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的影響
　　目的：探討高氧及TGF-β1干預(yù)小鼠肺泡Ⅱ型細(xì)胞(AECⅡ)后，是否發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)及其影響。
　　方法：小鼠肺泡Ⅱ型細(xì)胞系MLE-12，隨機(jī)分為空氣暴露組、高氧暴露組、TGF-β1干預(yù)空氣暴露組、TGF-β1干預(yù)高氧暴露組。觀察各組6、12、24、48h細(xì)胞形態(tài)變化。應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光雙標(biāo)法及熒光定量PCR法檢測(cè)各組各時(shí)間點(diǎn)肺表面活性物質(zhì)B(SP-B

2、)及成纖維細(xì)胞特異性蛋白1(FSP1)蛋白和mRNA的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：隨著高氧及TGF-β1干預(yù)時(shí)間的延長(zhǎng)，AECⅡ逐漸由鵝卵石樣變成紡錘體形狀，獲得成纖維細(xì)胞樣外觀。同時(shí)，AECⅡ特異性標(biāo)記SP-B表達(dá)逐漸減弱，成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)記FSP1表達(dá)逐漸增強(qiáng)，24h時(shí)兩者時(shí)可見(jiàn)明顯的共表達(dá)。高氧暴露組、TGF-β1干預(yù)空氣暴露組及TGF-β1干預(yù)高氧暴露組24、48h SP-B mRNA表達(dá)較同時(shí)間空氣暴露組下調(diào)，而FSP1 m

3、RNA表達(dá)較同時(shí)間空氣暴露組上調(diào)。
　　結(jié)論：高氧及TGF-β1均能誘導(dǎo)AECⅡ發(fā)生上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化，且兩者對(duì)EMT的作用具有時(shí)間依賴性。
　　第二部分：肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化機(jī)制對(duì)支氣管肺發(fā)育不良纖維化影響的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：觀察高氧暴露新生小鼠上皮細(xì)胞標(biāo)記(肺表面活性物質(zhì)蛋白B，[SP-B])及成纖維細(xì)胞特異性標(biāo)記(成纖維細(xì)胞特異性蛋白，[FSP1])在新生小鼠中的表達(dá)情況，探討肺內(nèi)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)換(Epithelial-

4、Mesenchymal Transition，EMT)在支氣管肺發(fā)育不良(bronchopulmonary dysplasia，BPD)中的作用及機(jī)制的研究。
　　方法：新生的1d的C57BL/6小鼠隨機(jī)分為：BPD組及對(duì)照組，應(yīng)用高濃度氧暴露制作BPD小鼠模型，HE染色、放射性肺泡計(jì)數(shù)(RAC)、Masson染色、免疫熒光雙標(biāo)及熒光定量PCR技術(shù)，觀察高氧暴露后3、7、14、21 d肺組織病理改變及SP-B和FSP1蛋白、mRN

5、A在BPD小鼠中隨時(shí)間變化的表達(dá)情況；BPD小鼠行肺功能檢測(cè)，評(píng)價(jià)其生理病理功能的改變。
　　結(jié)果：與對(duì)照組比較，BPD組高氧暴露后小鼠肺組織逐漸出現(xiàn)發(fā)育障礙、膠原沉積明顯；SP-B表達(dá)于21d時(shí)低于對(duì)照組(P<0.05)，而FSP1表達(dá)相應(yīng)的增強(qiáng)(P<0.05)，同時(shí)第14、21d SP-B及FSP1在肺組織內(nèi)出現(xiàn)共表達(dá)，而對(duì)照組相應(yīng)時(shí)間未見(jiàn)SP-B及FSP1共表達(dá)存在；肺功能檢測(cè)顯示BPD組與對(duì)照組相比呼吸頻率(F)及潮氣量(