缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子在支氣管肺發(fā)育不良發(fā)病機制中的作用.pdf

1、一、HIMF在高氧所致新生鼠支氣管肺發(fā)育不良模型中的表達變化
　　目的：探討缺氧誘導(dǎo)絲裂原因子(hypoxia-inducedmitogenicfactor,HIMF)在高氧誘導(dǎo)的新生鼠支氣管肺發(fā)育不良模型中的表達變化。
　　方法：昆明新生鼠24只隨機分為高氧暴露組(n=12)、對照組(n=12),分別置于氧箱(85％O2)及正?？諝?21%O2)中飼養(yǎng)7-28天,采用HE染色觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變,運用westernblot

2、和real-timePCR方法檢測小鼠肺組織中HIMF蛋白和mRNA表達水平。
　　結(jié)果：對照組小鼠肺泡發(fā)育正常;高氧暴露組小鼠肺泡融合,肺泡間隔增寬,放射狀肺泡變少;高氧暴露組第7天、第14天和第21天的小鼠肺組織HIMF蛋白和mRNA水平和對照組相比分別增高2.67-5.38倍(P<0.05)、2.527-2.618倍(P<0.05),而高氧暴露28天時分別降低73.3%(P<0.05)、56.35%(P<0.05)。

3、　　結(jié)論：成功建立新生鼠支氣管肺發(fā)育不良模型,HIMF基因表達發(fā)生動態(tài)改變,可能參與支氣管肺發(fā)育不良的發(fā)病機制。
　　二、高氧對肺II型上皮細胞和成纖維細胞中HIMF基因表達的影響
　　目的：探討高氧對肺II型上皮細胞和成纖維細胞中HIMF基因表達的影響。
　　方法：將肺II型上皮細胞(MLE-12)和成纖維細胞(NIH/3T3)分為對照組、高氧組,分別置于正常氧濃度(21%O2)及高氧(85%O2)條件下培養(yǎng)3-18

4、h,運用westernblot和real-timePCR法檢測細胞中HIMF及其相關(guān)因子ETS1、血管內(nèi)皮生長因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的蛋白和mRNA表達水平;運用小干擾RNA(siRNA)沉默HIMF、ETS1后,同樣用上述方法對其基因表達進行檢測。
　　結(jié)果：對照組MLE-12和NIH/3T3細胞中HIMF及其相關(guān)基因均有表達。與對照組比較,高氧組細胞在高氧暴露3h、6h

5、、9h、18h后,HIMF的蛋白和mRNA水平分別增高1.72-2.91倍(P<0.05)、2.783-5.162倍(P<0.05),ETS-1的蛋白和mRNA水平分別增高1.56-2.72倍(P<0.05)、2.624-5.122倍(P<0.05)而VEGF蛋白和mRNA水平分別降低了50.1%-69.6%、40.35%-70.32%;兩組細胞中HIMF與ETS1、HIMF與VEGF表達變化具有顯著相關(guān)性(P<0.05),而ETS1與

6、VEGF表達變化無顯著相關(guān)性(P>0.05)。
　　結(jié)論：高氧對肺II型上皮細胞和成纖維細胞中HIMF及其相關(guān)因子的表達具有顯著影響,HIMF基因可能在高氧所致肺II型上皮細胞和成纖維細胞損傷中具有一定作用。
　　第三部分HIMF在高氧誘導(dǎo)的肺II型上皮細胞和成纖維細胞凋亡中的作用
　　目的：探討HIMF在高氧誘導(dǎo)的肺II型上皮細胞和成纖維細胞凋亡中的作用
　　方法：設(shè)計、合成靶向HIMF基因的小干擾RNA(si

7、RNA),轉(zhuǎn)染肺II型上皮細胞(MLE-12)和成纖維細胞(NIH/3T3),分為對照組、高氧組,分別置于正常氧濃度(21%O2)及高氧(85%O2)條件下培養(yǎng)3h、6h、9h、18h,運用AO-EB、Hochest33258染色及AnnexinV-碘化丙錠雙染色流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡。
　　結(jié)果：MLE-12和NIH/3T3細胞高氧暴露3h、6h、9h、18h后,細胞凋亡率較對照組分別升高1.5-2.3倍(P<0.05)、1.1