高氧誘導(dǎo)支氣管肺發(fā)育不良早產(chǎn)鼠肺泡內(nèi)中性粒細(xì)胞和白介素8的變化.pdf

1、目的：通過高濃度氧吸入法誘導(dǎo)早產(chǎn)鼠發(fā)生支氣管肺發(fā)育不良(BPD)，制作BPD模型，并觀察肺組織形態(tài)學(xué)改變。探討白介素8(CXCL8)及中性粒細(xì)胞(PMN)在高氧致早產(chǎn)鼠BPD發(fā)生過程中肺內(nèi)的表達(dá)及意義。 方法：1.實(shí)驗分組及動物模型的制備：將孕21天的SD大鼠行剖腹產(chǎn)取出仔鼠，出生后6小時內(nèi)隨機(jī)分為兩組，即對照組(空氣組)和實(shí)驗組(高氧組)，每組60只。實(shí)驗組置于有機(jī)玻璃常壓氧箱內(nèi)，持續(xù)輸入氧氣，吸氧濃度(FiO2)維持在90％

2、以上，鈉石灰吸收CO2，溫度為25～27℃，濕度50％～70％，對照組置于空氣中(FiO221％)，環(huán)境溫度、濕度等控制因素同實(shí)驗組。2.標(biāo)本的采集和處理：分別于實(shí)驗后1天(d)、3d、5d、10d、14d從兩組中隨即各抽取8只。6只麻醉后進(jìn)行肺泡灌洗，將支氣管肺泡灌洗液(BALF)離心(2000轉(zhuǎn)/分，4℃，5min)，上清液采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)方法測定CXCL8的含量，底層沉淀混懸于0.5ml的PBS中，取10μl制成

3、直徑約1cm的細(xì)胞涂片，行瑞氏-吉姆薩染色，光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行中性粒細(xì)胞計數(shù)。另2只麻醉后剖開胸腔，分離肺組織，切片HE染色，光鏡下觀察肺組織病理改變。 結(jié)果：1、肺組織病理學(xué)改變空氣組1d后肺組織在呼吸細(xì)支氣管和終末囊泡壁出現(xiàn)小而淺的原始肺泡，肺泡結(jié)構(gòu)不規(guī)則，肺泡間隔較厚；空氣組隨日齡增加終末氣腔數(shù)量增多，肺泡結(jié)構(gòu)逐漸規(guī)整，肺泡大小較均勻，肺泡間隔變薄，進(jìn)行性肺泡化。高氧組1d較空氣組無明顯差別；高氧組3d可見小血管擴(kuò)張、充血，

4、肺泡腔內(nèi)有紅細(xì)胞滲出，肺泡間隔內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤如PMN的浸潤，間質(zhì)細(xì)胞增多；高氧組5d肺泡內(nèi)有紅細(xì)胞滲出，肺泡間隔內(nèi)有炎性細(xì)胞浸潤和間質(zhì)細(xì)胞增多，肺泡腔變大，肺泡間隔變厚；10d時肺結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡腔擴(kuò)大，肺泡數(shù)量減少，肺泡間隔更厚，肺間質(zhì)細(xì)胞增加，肺泡間隔內(nèi)可見大量炎性細(xì)胞浸潤，其中主要是PMN；高氧14d時正常肺泡結(jié)構(gòu)消失，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂，肺泡腔明顯擴(kuò)大，部分肺泡融合，肺泡數(shù)量明顯減少，肺泡間隔仍較厚，肺泡間隔內(nèi)仍有炎性細(xì)胞浸潤，肺間質(zhì)

5、細(xì)胞增加，肺泡間質(zhì)可見纖維樣改變； 2、BALF中CXCL8的含量與同日齡空氣組比較，實(shí)驗組早產(chǎn)鼠吸入高濃度氧1d后BALF中的CXCL8含量無明顯變化(P>0.05)；從第3天起含量呈明顯上升，并維持高水平到14d，與同日齡對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)； 3、PMN計數(shù)與同日齡空氣組比較，實(shí)驗組早產(chǎn)鼠吸入高濃度氧1d后BALF中的PMN計數(shù)量無明顯變化(P>0.05)；從高氧暴露3d起，與同日齡空氣組比

6、較，高氧組早產(chǎn)鼠BALF中的PMN有明顯升高(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義；4、高氧1～14d早產(chǎn)鼠BALF中CXCL8的表達(dá)水平與PMN數(shù)呈中度正相關(guān)，r=0.564，P<0.01；而前10d高氧組BALF中CXCL8的表達(dá)水平與PMN數(shù)呈高度正相關(guān)，r=0.936，P<0.01。 結(jié)論：1、高濃度氧可導(dǎo)致早產(chǎn)大鼠肺損傷并逐步發(fā)展成BPD；2、早產(chǎn)鼠發(fā)生BPD過程中肺泡內(nèi)CXCL8濃度持續(xù)增高和PMN數(shù)量顯著增多，提示CX