角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)高氧誘導(dǎo)新生大鼠支氣管肺發(fā)育不良模型的干預(yù)研究.pdf

1、目的:
　　 探討高氧環(huán)境下新生SD大鼠肺組織的病理變化、肺表面活性蛋白(SPs)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和Ⅷ因子的表達(dá)變化,并觀察角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)的干預(yù)效果,以期為臨床防治高氧肺損傷提供一條新的有效途徑。
　　 方法:
　　 將108只新生SD大鼠隨機(jī)分為三組。A組:空氣對(duì)照組,B組:高氧模型組,C組:高氧+KGF干預(yù)組。每組36只。每組又隨機(jī)分為3、7、14天亞組。B、C組大鼠持續(xù)暴露于>95

2、％氧箱中直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束,C組于吸氧同時(shí)于背部皮下注射htKGF1mg/kg/d,連用3天后改為0.5mg/kg/d直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。A組和B組給予等量生理鹽水。A組大鼠呼吸空氣。3、7、14天亞組在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)取肺組織,光鏡下觀察肺組織病理學(xué)變化并作肺泡輻射狀記數(shù)(RAC),透射電鏡下觀察肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變,采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)肺組織SPs、VEGF、Ⅷ因子(代表微血管密度)表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:

3、　　 光鏡:空氣對(duì)照組3天,肺尚處于囊泡期,肺間隔很厚。7天出現(xiàn)肺泡化,肺泡大小均一,肺間隔變薄,14天肺泡化成熟,肺泡大小均一,肺間隔明顯變薄。與對(duì)照組相比,高氧模型組暴露3天,小血管擴(kuò)張充血,肺泡腔內(nèi)出現(xiàn)紅細(xì)胞及炎細(xì)胞,肺間質(zhì)細(xì)胞增多；高氧暴露7天肺間隔變厚,間質(zhì)細(xì)胞及膠原樣細(xì)胞增多,肺實(shí)質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂,肺泡腔大小不一,部分肺泡融合,肺泡數(shù)減少；高氧暴露14天,肺泡數(shù)明顯減少,肺泡間隔明顯增厚,出現(xiàn)明顯纖維化改變。高氧+KGF干預(yù)組3

4、天肺泡腔炎癥細(xì)胞滲出不明顯,7天肺泡大小較均勻,少量肺泡腔變大,肺泡壁較薄,14天見(jiàn)肺泡結(jié)構(gòu)較規(guī)整,少量肺泡腔變大,肺泡融合不明顯,肺泡間隔增生不明顯。高氧組3天RAC與空氣對(duì)照組相比差異無(wú)顯著性,高氧組7天,14天RAC與空氣對(duì)照組相比差異有顯著意義(P<0.01)。高氧+KGF干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)RAG計(jì)數(shù)與空氣組比較差異無(wú)顯著性。②電鏡:空氣對(duì)照組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,胞漿內(nèi)可見(jiàn)板層小體(LB)和線粒體(Mi),線粒體豐富,結(jié)構(gòu)清晰

5、,質(zhì)膜連續(xù)完整,肺間質(zhì)內(nèi)無(wú)膠原沉積。肺泡Ⅰ型細(xì)胞成扁平狀,結(jié)構(gòu)完整,染色質(zhì)分布均勻,線粒體結(jié)構(gòu)清晰,無(wú)腫脹；肺泡毛細(xì)血管豐富,血管內(nèi)皮細(xì)胞成扁平狀,結(jié)構(gòu)完整。高氧模型組3天肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞胞膜尚完整,數(shù)量增加,板層小體結(jié)構(gòu)松散,有排空現(xiàn)象,線粒體不同程度的腫脹,部分內(nèi)皮細(xì)胞腫脹,吞飲泡增加,基底膜結(jié)構(gòu)不清晰。7天:各種細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)改變較3天時(shí)更加明顯,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹,線粒體中度腫脹,體積增大,胞質(zhì)內(nèi)板層小體不多,毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫

6、脹明顯,偶見(jiàn)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡改變,部分肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞核固縮,核膜和細(xì)胞膜破壞,細(xì)胞器溶解消失；14天:上述變化明顯加重,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞數(shù)量不多,肺泡毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹更加明顯,數(shù)量減少,線粒體嵴減少、斷裂,板層小體基本排空,肺間質(zhì)有大量纖維組織增生。高氧+KGF干預(yù)組3天肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整,數(shù)量增加,線粒體、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞腫脹不明顯。7天:少量肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹,數(shù)目增加,線粒體腫脹不明顯,偶見(jiàn)體積增大,毛細(xì)血管內(nèi)皮

7、細(xì)胞輕微腫脹,未見(jiàn)上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞凋亡改變；14天:與高氧模型組比較,肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞、毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞數(shù)目增多,細(xì)胞腫脹明顯減輕,線粒體輕度腫脹,板層小體結(jié)構(gòu)尚完整。③肺表面活性蛋白的表達(dá):主要分布于AEC Ⅱ,呈棕黃色顆粒,支氣管、細(xì)支氣管上皮細(xì)胞內(nèi)也有微量表達(dá)。高氧模型組3天時(shí)SP-A、SP-B、SP-C表達(dá)強(qiáng)度較空氣對(duì)照組增強(qiáng),P<0.05:高氧暴露7天時(shí)SP-A、SP-B、SP-C表達(dá)強(qiáng)度與空氣對(duì)照組比較,差異無(wú)顯著性意義,

8、P>0.05,高氧暴露14天時(shí)SP-A、SP-B、SP-C表達(dá)強(qiáng)度較空氣對(duì)照組和高氧+KGF干預(yù)組減弱,差異有顯著性,P<0.01。高氧+KGF干預(yù)組與空氣對(duì)照組比較,除SP-A3天差別有統(tǒng)計(jì)意義外(P=0.047),SP-B、SP-C在3天、7天、14天的表達(dá)無(wú)顯著性差異,P>0.05。④肺組織VEGF蛋白表達(dá):空氣對(duì)照組VEGF主要在肺組織肺泡間隔表達(dá),在血管平滑肌和支氣管上皮也有陽(yáng)性表達(dá),生后3天肺組織VEGF表達(dá)增加以遠(yuǎn)端氣道上

9、皮表達(dá)增加為甚,7天以后肺泡上皮和肺泡間隔增多,14天明顯增加,與生后3天組之間比較差異有顯著性(P<0.01)。高氧模型組VEGF蛋白表達(dá)水平在生后7天開(kāi)始下降,生后14天進(jìn)一步下降,與空氣對(duì)照組同時(shí)間點(diǎn)比較差異有顯著性(P<0.01)。高氧+KGF干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)VEGF表達(dá)與空氣組比較差異無(wú)顯著性。⑤Ⅷ因子表達(dá):主要在遠(yuǎn)端肺泡壁、間質(zhì)毛細(xì)血管及支氣管纖毛的微血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)?？諝鈱?duì)照組Ⅷ因子表達(dá)隨時(shí)間的推移逐漸升高,高氧模型組Ⅷ因子

10、表達(dá)隨時(shí)間增加而減少,與3天空氣對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性(P>0.05),7天、14天Ⅷ因子表達(dá)強(qiáng)度與同時(shí)間點(diǎn)空氣對(duì)照組比較差異有顯著性(P<0.01),高氧+KGF干預(yù)組Ⅷ因子表達(dá)強(qiáng)度與同時(shí)間點(diǎn)空氣對(duì)照組比較差異無(wú)顯著性,7天、14天與高氧模型組比較,差異有顯著意義(P<0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 ①高氧對(duì)新生大鼠肺組織有損傷作用,并隨吸氧時(shí)間的延長(zhǎng)而加重。②高氧可引起肺微血管、肺泡細(xì)胞的發(fā)育障礙,肺微血管發(fā)育異常