漢族早產(chǎn)兒支氣管肺發(fā)育不良臨床危險因素及易感基因篩查.pdf

1、目的：
　　本研究對早產(chǎn)兒支氣管肺發(fā)育不良（Bronchopulmonary dysplasia，BPD）的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行前瞻性研究，但主要探討漢族早產(chǎn)兒BPD易感基因位點(diǎn)多態(tài)性與BPD發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。（1）探討早產(chǎn)兒BPD的臨床危險因素，為臨床防治提供依據(jù)；（2）在國內(nèi)首先對中國漢族裔BPD早產(chǎn)兒進(jìn)行多種易感基因位點(diǎn)的篩查及驗(yàn)證，首次與BPD嚴(yán)重程度進(jìn)行相關(guān)分析，并同時進(jìn)行易感基因位點(diǎn)的功能鑒定，為早產(chǎn)兒BPD的預(yù)測和預(yù)防，以及進(jìn)

2、行特效的個體化基因治療提供科學(xué)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　1.對符合入選標(biāo)準(zhǔn)的中國漢族裔BPD早產(chǎn)兒，在入住新生兒科后收集其性別、是否是試管嬰兒、胎齡（Gestational age，GA）、出生體質(zhì)量（Birth weight，BW）、阿氏評分、產(chǎn)前使用地塞米松、輔助通氣時間、輔助通氣方式、肺表面活性物質(zhì)（Pulmonary surfactant，PS）等可能與BPD發(fā)生發(fā)展相關(guān)的臨床資料，探討其與BPD的發(fā)生及嚴(yán)重程度的

3、關(guān)系，從而篩選出早產(chǎn)兒BPD可能的臨床危險因素。
　　2.根據(jù)國內(nèi)外文獻(xiàn)研究，篩選出可能與BPD發(fā)生發(fā)展有關(guān)的17種BPD候選易感基因36個基因位點(diǎn)。
　　3.對在2013年4月至2014年12月期間入住廣東省人民醫(yī)院新生兒科的符合入選標(biāo)準(zhǔn)的92例漢族早產(chǎn)兒，于入院3天內(nèi)采集靜脈血2～3ml，提取DNA后應(yīng)用PCR擴(kuò)增、蝦堿性磷酸酶（Shrinp alkalinephos phatase，SAP）消化反應(yīng)、單堿基延伸及DNA

4、質(zhì)譜法對上述36個基因位點(diǎn)進(jìn)行檢測，對結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，探討其與BPD的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　共有92例漢族早產(chǎn)兒符合入選標(biāo)準(zhǔn)納入本研究，其中外院轉(zhuǎn)入55例，本院出生37例，均來自廣東或廣西；男性53例，女性39例，GA26~32周，平均29.2±1.5周，BW760~1500g，平均1156±221g；未發(fā)生BPD者28例，發(fā)生BPD者64例，其中輕度25例，中度13例，重度26例；根據(jù)是否發(fā)生BPD分為兩組：Non-B

5、PD（NBPD）組和BPD組；根據(jù)是否發(fā)生BPD及BPD嚴(yán)重程度分為四組：Non-BPD（NBPD），輕度BPD組（BPD1），中度BPD組（BPD2）和重度BPD組（BPD3）。
　　1.單因素分析：①計(jì)數(shù)資料采用卡方檢驗(yàn)：出生后是否進(jìn)行氣管插管滴入 PS，以及出生后初始采用的輔助通氣方式，均對早產(chǎn)兒 BPD發(fā)生與否產(chǎn)生影響，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=13.39，P<0.01和X2=11.20，P<0.01）；②計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)

6、：BPD組輔助通氣時間為33.82±25.07d，明顯長于NBPD組（3.12±2.89d），而BPD組的GA和BW分別為28.70±1.32w和1114.92±225.00g，明顯低于NBPD組（30.46±1.24w和1250.80±184.00g），差異有顯著意義（t=6.207，P<0.01；t=6.036，P<0.01；t=2.787，P<0.01）；③多組計(jì)量資料采用單因素方差分析：重度BPD組（BPD3）的GA和BW分別為

7、28.28±1.26w和1016.70±276.60g，均明顯低于NBPD和輕度BPD組（BPD1）（GA和BW分別為29.23±1.12w和1211.20±124.40g），而輔助通氣時間則明顯延長（51.16±26.56d）（BPD1為17.17±13.61d），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）。
　　2.多因素分析：采用二分類 Logistic對上述因素進(jìn)行多因素回歸分析，結(jié)果提示GA、BW和輔助通氣時間仍與BPD發(fā)生發(fā)展顯

8、著相關(guān)（P<0.05）。①BW：BW≤1235g的早產(chǎn)兒較BW>1235g者BPD發(fā)生率為高（P=0.039，OR=10.98，B=2.397）；②GA：GA≤30w的早產(chǎn)兒較GA>30w者BPD發(fā)生率為高（P=0.021,OR=14.8，B=2.695）；③輔助通氣時間：輔助通氣時間≤7d的早產(chǎn)兒比輔助通氣時間>7d者 BPD發(fā)生率較低（P<0.01，OR=0.012，B=-4.399）。
　　3.基因位點(diǎn)檢測：對篩選出的17種

9、BPD候選易感基因36個基因位點(diǎn)進(jìn)行檢測，發(fā)現(xiàn)20個位點(diǎn)基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律（P>0.05），具有群體代表性，列入候選基因；9個位點(diǎn)基因型分布不符合 Hardy-Weinberg平衡定律（P<0.05），進(jìn)行單獨(dú)統(tǒng)計(jì)分析；7個位點(diǎn)基因型不適用Hardy-Weinberg平衡定律檢測。進(jìn)一步的統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明，在NBPD組和BPD組中，α腫瘤壞死因子（Tumor necrosis factorα，TNF-α）

10、（rs1799724）、肺表面活性物質(zhì)蛋白（Surfactant protein，SP）B-18A/C（rs2077079）以及SPA1-AA219（rs4253527）基因位點(diǎn)多態(tài)性存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　1) TNF-α（rs1799724）以CC型最為常見，TC型次之，TT型最少見，等位基因頻率以C型多見；BPD組CC、TC、TT基因型頻率分別為75.0％、23.4%、1.6%，C等位基因頻率86.7%、T等位

11、基因頻率13.3%；NBPD組CC、TC、TT基因型頻率分別為57.1%、28.6%、14.3%，C等位基因頻率71.4%、T等位基因頻率28.6%，兩組TNF-α（rs1799724）基因型頻率及等位基因頻率比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=6.233，P=0.034和X2=6.188，P=0.013）；BPD組中TT型僅1例（1/64），頻率為1.6%，而NBPD組中TT型4例（4/28），頻率為14.3%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

12、（X2=6.135，P=0.029）。
　　2) SPB-18A/C（rs2077079）以CA型最為常見，AA型次之，CC型最少見，等位基因頻率以A型多見；BPD組CA、AA、CC基因型頻率分別為59.4%、20.3%、20.3%，C和A等位基因頻率均為50.0%；NBPD組CA、AA、CC基因型頻率分別為46.4%、46.4%、7.2%，A等位基因頻率69.6%、C等位基因頻率30.4%，兩組 SPB-18A/C（rs2077

13、079）的基因型頻率和等位基因頻率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=6.907，P=0.028和X2=6.100，P=0.014）；BPD組中AA型13例（13/64），頻率20.3%，NBPD組中AA型13例（13/28），頻率46.4%，兩組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（X2=6.278，P=0.022）。
　　3) SPA1-AA219（rs4253527）以CC型最為常見，TC型次之，等位基因頻率以C型多見；BPD組中CC、TC基因

14、型頻率分別為53.1%、46.9%，C、T等位基因頻率分別為76.6%和23.4%；NBPD組中CC、TC基因型頻率分別為82.1%、17.9%，C、T等位基因頻率分別為91.1%和8.9%。與 NBPD組比較，BPD組患兒 SPA1-AA219（rs4253527）位點(diǎn)基因型CC減少、TC增多（X2=6.958，P=0.010），C等位基因分布頻率明顯降低而T等位基因分布頻率明顯增高（X2=5.234，P=0.021），差異存在顯著性

15、意義。
　　4)在所檢測的17種BPD候選易感基因36個基因位點(diǎn)中，未發(fā)現(xiàn)與BPD嚴(yán)重程度相關(guān)的基因位點(diǎn)（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1. BPD的發(fā)生發(fā)展是由多種危險因素共同作用所導(dǎo)致的，其中GA、BW及輔助通氣時間可能是其發(fā)生發(fā)展的獨(dú)立危險因素。GA越小、BW越低，BPD的發(fā)生率越高，嚴(yán)重程度也越明顯；輔助通氣時間大于7天，BPD發(fā)生風(fēng)險明顯增加，隨著輔助通氣時間增加，BPD發(fā)生風(fēng)險越大，嚴(yán)重程度越明顯。

16、r>　　2. TNF-α（rs1799724）、SPB-18A/C（rs2077079）、SPA1-AA219（rs4253527）基因位點(diǎn)多態(tài)性可能與漢族早產(chǎn)兒BPD發(fā)生有關(guān)。TNF-α（rs1799724）TT型、SPB-18A/C（rs2077079）AA型可能對BPD的發(fā)生發(fā)展有保護(hù)作用，攜帶TNF-α（rs1799724）T等位基因、SPB-18A/C（rs2077079）A等位基因者患 BPD風(fēng)險較低。SPA1-AA219（