大彈涂魚遺傳多樣性及其與彈涂魚遺傳標記RAPD的研究.pdf

1、本文以2002年3月和2002年9月采自浙江寧海三門灣海區(qū)的大彈涂魚（Boleophthalmus pectinirostris L.）和彈涂魚(Periophthalmus cantonensis O.)為材料，對大彈涂魚的遺傳多樣性及其與彈涂魚的遺傳標記進行了RAPD研究。 基因組DNA提取方法：應用上海生物工程公司的UNIQ-10柱式基因組DNA抽提試劑盒能快速簡便（15分鐘內，除去樣品準備時間）獲得高質量的基因組DNA，

2、其長度在21kb左右，A260nm/A280nm比值在1.82～1.93之間，DNA濃度為173.7356μg/ml。彈涂魚的RAPD—PCR擴增的適宜反應條件：擴增反應總體積25μl；其中包括DNA 25ng，dNTP 0.1mmol/L，引物濃度0.4μmol/L，鎂離子的濃度1.5mmol/L，1.0U Taq DNA聚合酶。擴增程序為94℃預變性5min，94℃變性1min，36℃退火1min，72℃延伸2min，共40個循環(huán)，

3、最后一個循環(huán)結束后，72℃延伸10min，4℃保溫。 大彈涂魚遺傳多樣性RAPD研究結果：20個引物共擴增出100個DNA片段，多態(tài)位點比例為21﹪，任意兩個個體間遺傳相似度最大為0.9938，最小為0.9239，平均為0.9645。任意兩個個體間的遺傳距離最大為0.0761，最小為0.0062，絕大多數(shù)為0.0200-0.0500；大彈涂魚野生群體的平均雜合度為0.2018，遺傳距離平均值為0.0355；Shannon多樣性指

4、數(shù)和Shannon多樣性值分別為5.918和0.0592。 大彈涂魚和彈涂魚RAPD標記研究結果：21個引物，共擴增出124條帶，兩種彈涂魚共有條帶數(shù)為13條；大彈涂魚擴增出了73條特異性譜帶，彈涂魚擴增出了64條特異性譜帶。大彈涂魚和彈涂魚種群內平均帶紋頻率分別為0.9452和0.9809，相應的遺傳變異度則為0.0548和0.0191。大彈涂魚的ABS（平均帶紋相似系數(shù)）為0.9893，彈涂魚的ABS為0.9947，大彈涂魚