SOCS3促潰瘍性結(jié)腸炎腸道炎癥復發(fā)的機制研究.pdf

1、目的:潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)是炎癥性腸病(inflammatory boweldisease，IBD)的一種，其病因尚不明確。經(jīng)免疫調(diào)節(jié)治療患者可獲得病情緩解，但多數(shù)患者出現(xiàn)腸道炎癥的反復發(fā)作。前期研究發(fā)現(xiàn)，潰瘍性結(jié)腸炎患者活動期及緩解期腸黏膜中細胞因子信號抑制蛋白-3(suppressor of cytokine signaling-3，SOCS3)陽性腸上皮細胞的數(shù)量較正常人腸黏膜中明顯增多，進一

2、步研究發(fā)現(xiàn)完全緩解期（臨床緩解，內(nèi)鏡緩解及組織學緩解）的潰瘍性結(jié)腸炎患者腸上皮細胞中SOCS3的表達量與緩解期的長短相關(guān)，即上皮細胞SOCS3表達量越高，患者緩解期越短，提示SOCS3表達量的檢測有利于對疾病復發(fā)預測，腸上皮細胞SOCS3高表達可能是潰瘍性結(jié)腸炎復發(fā)的危險因素。SOCS3促進潰瘍性結(jié)腸炎復發(fā)分子機制的探究不僅有助于對潰瘍性結(jié)腸炎致病機制的理解，而且可能為潰瘍性結(jié)腸炎緩解期的維持提供新的治療策略。近期，IL-22/STAT

3、3信號通路在腸黏膜屏障穩(wěn)態(tài)維持中的重要作用逐漸被揭示，而SOCS3是STAT3的經(jīng)典靶蛋白，可反饋抑制STAT3活性。潰瘍性結(jié)腸炎患者緩解期腸黏膜較正常人脆弱，我們假設(shè)IL-22/STAT3信號通路在潰瘍性結(jié)腸炎緩解期可能發(fā)揮重要作用，SOCS3高表達可能通過削弱該通路的黏膜保護作用促進腸道炎癥的復發(fā)。
　　方法:收集處于完全緩解期的潰瘍性結(jié)腸炎患者及正常人腸黏膜組織標本，免疫組化檢測標本中IL-22及IL-22/STAT3信號通

4、路下游蛋白c-Myc，Survivin的表達。構(gòu)建SOCS3真核表達載體及SOCS3穩(wěn)定過表達的HCT-116，HT-29腸上皮細胞株(116-SOCS3，29-SOCS3)。CCK-8檢測SOCS3過表達對IL-22促腸上皮細胞增殖作用的影響。劃痕實驗(wounding assay)檢測SOCS3過表達對IL-22促腸上皮損傷修復作用的影響。實時定量PCR，Westernblot實驗檢測SOCS3過表達及STAT3敲除對IL-22誘導

5、STAT3活化及腸上皮細胞表達抗菌肽、增殖凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，c-Myc，Survivin，Bcl-xL)的影響。此外，利用糖原染色及實時定量實驗我們檢測了SOCS3過表達對腸上皮細胞黏液素(MUC1)表達的影響。Westernb lot檢測SOCS3過表達對IL-6，IL-13和IL-22介導的STAT1，STAT3，STAT6，ERK和AKT等信號轉(zhuǎn)導通路的影響
　　結(jié)果:潰瘍性結(jié)腸炎患者緩解期腸黏膜中IL-22陽性炎癥

6、細胞的數(shù)量較正常人明顯增多，但腸上皮細胞c-Myc及Survivin的表達量與正常人無顯著差異。SOCS3可抑制IL-22誘導的腸上皮細胞增殖。SOCS3可削弱IL-22的促腸上皮損傷修復作用。SOCS3可減弱甚至阻斷IL-22對上皮細胞STAT3信號通路的激活，并抑制IL-22/S TAT3誘導的抗菌肽、增殖凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，c-Myc，S urvivin)的表達。SOCS3過表達可抑制腸上皮細胞黏液素(MUC1)的產(chǎn)生。SO