石決明水提液對(duì)白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激影響的研究.pdf

1、本課題是通過(guò)研究D-半乳糖誘導(dǎo)白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激機(jī)制，進(jìn)一步探究石決明水提液對(duì)白內(nèi)障大鼠晶狀體的防護(hù)作用。第一部分是前期準(zhǔn)備，第二部分是用免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-PCR方法分別來(lái)說(shuō)明石決明水提液對(duì)白內(nèi)障大鼠晶狀體上皮細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激的影響。
　　 第一部分:前期準(zhǔn)備
　　 目的:
　　 制作D-半乳糖誘導(dǎo)白內(nèi)障大鼠模型及用藥，為下一部實(shí)驗(yàn)做準(zhǔn)備。
　　 方法:
　

2、　 1實(shí)驗(yàn)分組:健康SD大鼠100只，雙眼為實(shí)驗(yàn)眼（共200枚晶狀體），鼠齡為40天，體重在200±10 g左右，隨機(jī)平均分為4組:空白組、模型組、白內(nèi)停組、石決明組。
　　 2模型制作:D-半乳糖誘導(dǎo)白內(nèi)障大鼠模型制作[2]。
　　 3用藥:空白組、模型組用生理鹽水點(diǎn)眼，石決明組用石決明水提液點(diǎn)眼，白內(nèi)停組用白內(nèi)停滴眼液點(diǎn)眼，3次/天，1滴/次。
　　 4取材:第15天處死所有大鼠，在無(wú)菌操作下，分組取出大鼠

3、晶狀體并凍存于-80℃冰箱中備用。
　　 結(jié)果:
　　 第15天散瞳觀察大鼠晶狀體，參考祁明信、黃秀榕等的晶狀體混濁分期標(biāo)準(zhǔn)[3]，其中模型組晶狀體的混濁達(dá)到了Ⅱ期。白內(nèi)停組與石決明組晶狀體混濁程度比模型組輕，晶狀體的混濁程度達(dá)到了Ⅰ期?？瞻捉M的晶狀體透明。
　　 結(jié)論:
　　 石決明水提液能夠減輕晶狀體的混濁程度，延緩白內(nèi)障的發(fā)展。
　　 第二部分:免疫組織化學(xué)、Western blot和RT-

4、PCR方法檢測(cè)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激中CHOP，GRP78，XBP-1mRNA的表達(dá)
　　 目的:
　　 為了進(jìn)一步探究石決明水提液對(duì)白內(nèi)障大鼠晶狀體的防護(hù)作用。
　　 方法:
　　 將取出的大鼠晶狀體（空白組、模型組、白內(nèi)停組、石決明組）分別用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)CHOP（C/EBP homologous protein，C/EBP同源蛋白）的表達(dá)，用Western blot方法檢測(cè)GRP78（78-kDa glu

5、cose-regulated protein,78-kDa糖調(diào)節(jié)蛋白）的表達(dá)，用RT-PCR方法檢測(cè)XBP-1 mRNA(X-box binding protein1，X盒結(jié)合蛋白1 mRNA)的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)大鼠晶狀體上皮細(xì)胞CHOP的表達(dá):
　　 由免疫組化染色所見(jiàn)，陽(yáng)性表達(dá)為細(xì)胞膜和/或細(xì)胞質(zhì)有呈棕黃色的顆粒，則呈陽(yáng)性表達(dá)（圖1）。模型組的陽(yáng)性表達(dá)率92.62±2.32％

6、，石決明組的陽(yáng)性表達(dá)率44.72±3.51％，白內(nèi)停組的陽(yáng)性表達(dá)率45.77±4.54％，空白組的陽(yáng)性表達(dá)率5.74±3.20％（表1）。石決明組的陽(yáng)性表達(dá)率小于模型組(P＜0.05);石決明組的陽(yáng)性表達(dá)率與白內(nèi)停組無(wú)明顯差異(P＞0.05);模型組的陽(yáng)性表達(dá)率大于空白組(P＜0.01)。
　　 2 Western blot方法檢測(cè)大鼠晶狀體上皮細(xì)胞GRP78的表達(dá):
　　 模型組陽(yáng)性表達(dá)0.556±0.16μg/ml，

7、石決明組的陽(yáng)性表達(dá)0.212±0.15μg/ml，白內(nèi)停組的陽(yáng)性表達(dá)0.321±0.26μg/ml，空白組的陽(yáng)性表達(dá)0.013±0.21μg/ml(表2)。石決明組的陽(yáng)性表達(dá)率小于模型組(P＜0.05);石決明組的陽(yáng)性表達(dá)率與白內(nèi)停組無(wú)明顯差異(P＞0.05);模型組的陽(yáng)性表達(dá)率大于空白組(P＜0.01)。
　　 3 R-PCR方法檢測(cè)大鼠晶狀體上皮細(xì)胞XBP-1mRNA的表達(dá):
　　 模型組陽(yáng)性表達(dá)9.2±0.04，石