甲基強(qiáng)的松龍對(duì)大鼠顱腦外傷后急性期危重病相關(guān)皮質(zhì)類固醇不足的影響及意義.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)刺激AFP特異性T細(xì)胞，檢測(cè)其殺傷功能，為研究AFP158-166特異性T細(xì)胞免疫治療奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：采用帶FITC熒光標(biāo)記的HLA-A2抗體，流式細(xì)胞技術(shù)篩選HLA-A2陽(yáng)性健康志愿者，通過(guò)HLA-A2基因分型高分辨檢測(cè)試劑盒(PCR-SSP)，選擇其中基因型為HLA-A0201者，取其外周血，密度梯度離心法分離獲取外周血單核細(xì)胞(PBMC)，通過(guò)加入人GM-CSF、IL-4及TNF-α等細(xì)胞因子貼壁粘附

2、培養(yǎng)法培養(yǎng)收獲樹突狀細(xì)胞(DC)，將DC負(fù)載HLA-A0201表位態(tài)AFP158-166后，按1:10比例將其與新鮮淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)，并加入人細(xì)胞因子IL-2刺激，出現(xiàn)細(xì)胞大量增殖后收獲細(xì)胞，行細(xì)胞毒性試驗(yàn)，用MTT法分別檢測(cè)其殺傷肝癌細(xì)胞、負(fù)載AFP的T2細(xì)胞，以及未負(fù)載AFP的T2的能力。
　　 結(jié)果：從13例健康志愿者中篩選出基因型HLA-A0201陽(yáng)性者4例，每50ml外周血培養(yǎng)的細(xì)胞中可收獲DC細(xì)胞2×106個(gè)，培養(yǎng)至

3、第7天檢測(cè)表面抗原：CD83、CD80和CD86陽(yáng)性率分別為(81.3±2.4)％、(92.8±1.4)％和(70.5±1.9)％。將DC負(fù)載AFP與淋巴細(xì)胞混合培養(yǎng)14d左右出現(xiàn)大量細(xì)胞增殖，行細(xì)胞毒性試驗(yàn)結(jié)果示，其對(duì)肝癌細(xì)胞、負(fù)載AFP的T2細(xì)胞有明顯殺傷作用，而對(duì)未負(fù)載AFP的T2細(xì)胞殺傷作用不明顯。
　　 結(jié)論：通過(guò)加入GM-CSF、IL-4及TNF-α等細(xì)胞因子體外貼壁粘附培養(yǎng)人PBMC可收獲樹突狀細(xì)胞，將樹突狀細(xì)胞負(fù)