甲基強的松龍對大鼠顱腦外傷后急性期危重病相關皮質類固醇不足的影響及意義.pdf

1、目的：體外培養(yǎng)刺激AFP特異性T細胞，檢測其殺傷功能，為研究AFP158-166特異性T細胞免疫治療奠定基礎。
　　 方法：采用帶FITC熒光標記的HLA-A2抗體，流式細胞技術篩選HLA-A2陽性健康志愿者，通過HLA-A2基因分型高分辨檢測試劑盒(PCR-SSP)，選擇其中基因型為HLA-A0201者，取其外周血，密度梯度離心法分離獲取外周血單核細胞(PBMC)，通過加入人GM-CSF、IL-4及TNF-α等細胞因子貼壁粘附

2、培養(yǎng)法培養(yǎng)收獲樹突狀細胞(DC)，將DC負載HLA-A0201表位態(tài)AFP158-166后，按1:10比例將其與新鮮淋巴細胞混合培養(yǎng)，并加入人細胞因子IL-2刺激，出現細胞大量增殖后收獲細胞，行細胞毒性試驗，用MTT法分別檢測其殺傷肝癌細胞、負載AFP的T2細胞，以及未負載AFP的T2的能力。
　　 結果：從13例健康志愿者中篩選出基因型HLA-A0201陽性者4例，每50ml外周血培養(yǎng)的細胞中可收獲DC細胞2×106個，培養(yǎng)至

3、第7天檢測表面抗原：CD83、CD80和CD86陽性率分別為(81.3±2.4)％、(92.8±1.4)％和(70.5±1.9)％。將DC負載AFP與淋巴細胞混合培養(yǎng)14d左右出現大量細胞增殖，行細胞毒性試驗結果示，其對肝癌細胞、負載AFP的T2細胞有明顯殺傷作用，而對未負載AFP的T2細胞殺傷作用不明顯。
　　 結論：通過加入GM-CSF、IL-4及TNF-α等細胞因子體外貼壁粘附培養(yǎng)人PBMC可收獲樹突狀細胞，將樹突狀細胞負