攜rtPA靶向血栓多功能MR分子探針的構(gòu)建及表征.pdf

1、目的:制備攜帶溶栓藥物重組組織型纖溶酶原激活劑(Recombinanttissue plasminogen activator, rtPA)的靶向血栓MR分子探針，并對其一般理化性能、體內(nèi)外靶向血栓能力、溶栓能力及MR顯影能力進(jìn)行驗(yàn)證。
　　方法:采用碳二亞胺法將環(huán)狀精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸肽段(Cyclicarginine-glycine-aspartic，cRGD)連接于殼聚糖(Chitosan，CS)膜表面，得到CS-cRG

2、D膜;雙乳化溶劑揮發(fā)法（水/油/水法[W/O/W]）制備攜帶rtPA及載Fe3O4的聚乳酸羥基乙酸(Poly[lactic-co-glycolic acid]，PLGA)納米粒，通過制備條件的調(diào)整，分別得到Fe3O4-PLGA、Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3O4-PLGA-rtPA/C S-cRGD納米粒。用光學(xué)顯微鏡、透射電鏡及激光粒度儀檢測納米粒的形態(tài)、分散性、結(jié)構(gòu)、粒徑、粒徑分布及Ze

3、ta電位，激光共聚焦顯微鏡及流式細(xì)胞儀驗(yàn)證CS-cRGD膜對納米粒表面的被覆，F(xiàn)e3O4攜帶率及rtPA包封率分別用原子吸收光譜法及比色法測得，rtPA的體外釋放活性用生色底物法檢測。經(jīng)體外靶向血栓病理切片及靶向溶栓實(shí)驗(yàn)證實(shí)納米粒對體外血栓的靶向溶解能力后，分別用1.5 T及3.0 TMR掃描儀驗(yàn)證納米粒的弛豫性能及對體內(nèi)外血栓的靶向溶解顯影能力。
　　結(jié)果:各組納米粒均成功制得，形態(tài)規(guī)則，表面光滑呈球形，分散性好，粒徑較均一，透

4、射電鏡可見Fe3O4顆粒均勻鑲嵌于納米粒殼上，F(xiàn)e3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒的平均粒徑為395.2±12.2 nm，粒徑分布（多分散系數(shù)[polydispersity index，PDI]）為0.163±0.024，Zeta電位為29.0±1.5 mV。激光共聚焦顯微鏡顯示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米?？梢姯h(huán)狀綠色熒光，即異硫氰酸熒光素(Fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)I

5、TC)標(biāo)記的cRGD成功被覆于納米粒表面，流式細(xì)胞儀測得cRGD攜帶率為84.27％。Fe3O4攜帶率及rtPA包封率分別為49.3±3.4％，63.7±1.5％，體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示Fe3O4-PLGA-rtPA/CS及Fe3 O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒中釋放的rtPA的酶活性明顯高于Fe3O4-PLGA-rtPA納米粒。體外靶向血栓病理切片可見大量Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD納米粒聚集于血栓周邊，體

6、外靶向溶栓實(shí)驗(yàn)示Fe3O4-PLGA-rtPA、Fe3O4-PLGA-rtPA/CS和Fe3O4-PLGA-rtPA/CS-cRGD組溶栓率在60分鐘時(shí)分別為游離rtPA溶液的1.98、2.41、3.05倍。在MRI掃描中各組載Fe3O4的納米粒均可顯著降低T2*信號，與純Fe3O4溶液相比，其橫向弛豫率（Transverse relaxation rate，R2*）及信噪比(Signal-to-noise ratio，SNR)無顯著差