一個新的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)顆粒蛋白，RTN3-A的基因克隆及其功能初步分析.pdf

1、RTN基因家族是涉及膜泡運(yùn)輸及細(xì)胞生長分化的一類重要基因。在哺乳動物中，目前已經(jīng)鑒定出四種RTN基因的存在，每個RTN基因都產(chǎn)生兩個或兩個上以上的轉(zhuǎn)錄本。其中每個基因的最長轉(zhuǎn)錄本幾乎都在腦中特異性表達(dá)。在研究中，作者通過在NCBI進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘及EST拼接分析，發(fā)現(xiàn)了一個新的RTN3轉(zhuǎn)錄本。此轉(zhuǎn)錄本中2.3kb的大外顯子是已知的RTN3轉(zhuǎn)錄本所不具有的。因為其序列大大長于原來所發(fā)現(xiàn)的RTN3轉(zhuǎn)錄本，根據(jù)RTN家族成員命名規(guī)則，給它命名為R

2、TN3-A。通過克隆及測序人類及小鼠RTN3-AcDNA組裝片段，證實了預(yù)測的人類RTN3-A和小鼠Rtn3-A序列的正確性。在RNA水平上，通過16種組織的Northernblot分析，發(fā)現(xiàn)RTN3-A主要在腦中表達(dá)，并且其轉(zhuǎn)錄本的大小也與作者的預(yù)測完全一致。在蛋白質(zhì)水平上，以抗RTN3所有轉(zhuǎn)錄本編碼蛋白的公共C-末端19個氨基酸的抗體進(jìn)行Westernblot分析，在小鼠腦中證明了這種110kDa的RTN3-A蛋白的存在。通過小鼠R

3、tn3-AcDNA在鼠腦區(qū)的原位雜交分析發(fā)現(xiàn)，Rtn3-A在小鼠腦中呈現(xiàn)明顯的區(qū)域性分布。在大腦皮層，海馬及小腦的Purkinje細(xì)胞中，發(fā)現(xiàn)了強(qiáng)烈的Rtn3-A信號。在下丘腦區(qū)我們也發(fā)現(xiàn)了Rtn3-A信號的存在。通過比較，發(fā)現(xiàn)RTN3-A與RTN4-A在組織分布上有明顯的相似性，同時RTN3-A與RTN4-A在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)上分別具有RTN3-B1與RTN4-B1/NOGO-B二者相互作用的區(qū)域。由于目前已知RTN4-A的功能與神經(jīng)發(fā)育的