編碼內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白的基因hRTN3及其小鼠同源基因mRTN3的克隆與功能研究.pdf

1、我們在批量分離和克隆與腦發(fā)育及功能維持相關的cDNA時,從人的胎腦文庫中克隆到一個全長cDNA-hRTN3及小鼠的同源基因mRTN3,它們均屬于RTN（reticulon）家族.hRTN3 cDNA全長2559bp,含有一個編碼236個氨基酸殘基的開放閱讀框架.序列的第137-139位核苷酸為起始密碼子,旁側序列符合Kozak規(guī)律,在開放性閱讀框架5'上游有一個框內(nèi)終止密碼子,3'有典型的加尾信號,這些特點均顯示該序列為一全長的cDNA

2、.此cDNA序列已送至GenBank登錄,接受號為AF119297.實驗結果顯示mRTN3在大腦皮層、海馬、丘腦、腦干的神經(jīng)核團及脊髓的非膠質(zhì)細胞中有強信號.為進一步了解hRTN3蛋白的亞細胞定位,我們構建真核表達載體,使hRTN3cDNA編碼區(qū)重組到綠色熒光蛋白基因的上游,并用脂質(zhì)體（Lipofectamine）轉染到CHO細胞,48小時后得到高效表達.通過共聚焦顯微鏡觀察到融合蛋白定位于細胞質(zhì)中,呈不均勻分布,結合hRTN3 C末端

3、所具有的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的錨定序列KKXX,由此推斷該蛋白位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜.實驗結果顯示,hRTN3在正常腦組織中主要為神經(jīng)元大量表達,在膠質(zhì)細胞中基本無信號;在神經(jīng)膠質(zhì)細胞瘤中,hRTN3在腫瘤細胞中表達量明顯提高;但是在不同惡性程度的膠質(zhì)細胞瘤中,其表達量未見明顯差異.因此,我們推測hRTN3基因表達量的改變很可能是膠質(zhì)細胞瘤發(fā)生過程中的一個早期事件.此外為鑒定hRTN3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的相互作用蛋白,推斷hRTN3在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的功能,我們