擬南芥LYSOPL2基因及其油菜同源基因的克隆及功能分析.pdf

1、植物油脂的儲(chǔ)存形式為三酰甘油(TAG)，它是一種人類生活所必需的重要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，也是重要的工業(yè)原料和潛在的可再生生物質(zhì)能源。提高油料作物油脂含量是育種工作者改良作物品質(zhì)性狀的主要目標(biāo)。而應(yīng)用分子生物學(xué)方法分離油脂合成相關(guān)基因、研究植物油脂合成的分子機(jī)制顯然已成為分子育種的重要方向。單酰甘油?；D(zhuǎn)移酶MGAT是花生油脂合成過程中重要的調(diào)控因子，MGAT基因在酵母中的過表達(dá)可以導(dǎo)致甘油三酯的積累增加。在本研究中我們分別對(duì)擬南芥和油菜里MGAT

2、的同源基因LYSOPL2和BnCC5進(jìn)行了克隆和功能驗(yàn)證分析。本研究結(jié)果對(duì)于通過基因技術(shù)進(jìn)一步提高油料作物含油量具有潛在應(yīng)用價(jià)值。主要結(jié)果如下:
　　1)分別在擬南芥和油菜里克隆了MGAT的同源基因LYSOPL2和BnCC5。
　　2)構(gòu)建了擬南芥LYSOPL2基因的過表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化擬南芥，構(gòu)建了油菜BnCC5基因的RNAi干涉載體、含雙35S和自身啟動(dòng)子的過表達(dá)載體。
　　3)通過在擬南芥中過表達(dá)LYSOPL2基因，

3、發(fā)現(xiàn)T3、T4和T5代轉(zhuǎn)基因后代成熟種子的含油量與野生型相比較提高約2.6％，差異達(dá)到顯著水平;T3代純合的T-DNA插入突變體與野生型相比較，種子含油量降低4.51％，差異達(dá)到極顯著水平，T4、T5代純和的T-DNA插入突變體與野生型相比較，種子含油量降低0.6％，差異不顯著。
　　4)利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將油菜BnCC5基因的RNAi干涉載體、含雙35S啟動(dòng)子的過表達(dá)載體成功轉(zhuǎn)化到甘藍(lán)型油菜Westar和甲572，獲得了轉(zhuǎn)化株