DAL-1調(diào)控非小細(xì)胞肺癌EMT的分子機(jī)制及其生物信息學(xué)研究.pdf

1、 分類號(hào)： 密級(jí)： U D C ：學(xué)號(hào)： T10411201301003 南昌大學(xué)非全日制專業(yè)學(xué)位類博士研究生 學(xué) 位 論 文 DAL-1 調(diào)控非小細(xì)胞肺癌 調(diào)控非小細(xì)胞肺癌 EMT 的分子機(jī)制 的分子機(jī)制 及其生物信息學(xué)研究 及其生物信息學(xué)研究 The molecular mechanism and biological bioinformatics re

2、search of DAL -1 regulating NSCLC Epithelial-mesenchymal transition The molecular mechanism and biological bioinformatics research of DAL -1 regulating NSCLC Epithelial-mesenchymal transition 余鋒 培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學(xué)第一附屬醫(yī)院 指導(dǎo)

3、教師姓名、職稱：熊建萍 教授 申請(qǐng)學(xué)位的學(xué)科門類：臨床醫(yī)學(xué)博士 學(xué)科專業(yè)名稱：腫瘤學(xué) 論文答辯日期： 2016 年 6 月 3 日 答辯委員會(huì)主席： 吳曉牧 評(píng)閱人： 年 月 日 中文摘要 I中文摘要 中文摘要 研究背景： 研究背景： 目前肺癌是全球發(fā)病率和致死率最高的惡性腫瘤，其中非小細(xì)胞肺癌 (Non-small cell lung cancer，NSCLC)占全部肺癌的 80%。晚期

4、 NSCLC 預(yù)后差，侵襲和轉(zhuǎn)移是其主要的致死原因。因此，研究 NSCLC 轉(zhuǎn)移和侵襲的分子機(jī)理、探索有關(guān)的分子靶標(biāo)，成為目前亟待解決的課題。 研究目的： 研究目的： 本課題重點(diǎn)研究 DAL-1 基因在 NSCLC 侵襲與遷移中的作用機(jī)理，以希望為 NSCLC 的臨床治療提供新的靶標(biāo)與理論基礎(chǔ)。 研究方法： 研究方法： 根據(jù)人類 DAL-mRNA 編碼序列，設(shè)計(jì)并合成靶標(biāo) DAL-1 的 3 條特異性DAL-1 shRNA 表達(dá)質(zhì)粒（p

5、GPU6/GFP/Neo-sh710、sh1329、sh1436）和陰性對(duì)照質(zhì)粒 （pGPU6/GFP/Neo-shNC） ； 脂質(zhì)體介導(dǎo)法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到 NCI-H460 細(xì)胞系中，并對(duì)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行克隆，使用 Western 印跡和 RT-PCR 檢測(cè) DAL-1基因的表達(dá)水平，并計(jì)算表達(dá)抑制率。MTT 法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后的 NCI-H460 增殖水平，Transwell 小室檢測(cè)侵襲和遷移能力，討論細(xì)胞抑制 DAL-1 后的侵襲和

6、遷移水平。 以 R 語(yǔ)言為基礎(chǔ)，以 Bioconductor 為編程環(huán)境，利用多種成熟的軟件包設(shè)計(jì)了用于分析和挖掘基因芯片數(shù)據(jù)的系統(tǒng)。下載 GEO 中已經(jīng)上傳的 Affymetrix寡核苷酸基因芯片，包含人類 NSCLC 的原始數(shù)據(jù) GSE33532，對(duì)該基因芯片的原始數(shù)據(jù)進(jìn)行了包括數(shù)據(jù)下載、標(biāo)準(zhǔn)化處理、質(zhì)控、差異基因的篩選與分析、GO 分析、聚類以及通路總結(jié)，進(jìn)一步分析基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)以及分子相互作用。 研究結(jié)果： 研究結(jié)果： 1.

7、 DAL-1 基因的 基因的 RNAi 沉默效應(yīng)影響 沉默效應(yīng)影響 NCI-H460 細(xì)胞 細(xì)胞 設(shè)計(jì)和構(gòu)建靶向 DAL-1 的 pGPU6/GFP/Neo-DAL-1shRNA 質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒 pGPU6/GFP/Neo-shNC，建立 DAL-L 穩(wěn)定沉默的細(xì)胞 NCI-H460-sh1329 和陰性對(duì)照 NCI-H460- shNC 細(xì)胞。與陰性對(duì)照和空白質(zhì)粒（NCI-H460/ET）相比，NCI-H460-sh1329組DA