歐前胡素抗炎作用和尾葉香茶菜丙素抗腫瘤作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:NF-κB與HIF-1α參與炎癥反應(yīng)、腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡與血管生成等多種生物進(jìn)程。長白山藥用植物白芷中分離出的歐前胡素以及尾葉香茶菜中分離出尾葉香茶菜丙素分別以NF-κB與HIF-1α信號為藥物作用靶點(diǎn)，從細(xì)胞和分子水平深入研究其干預(yù)炎癥與腫瘤發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制，為抗炎、抗腫瘤藥物的開發(fā)提供可靠的科學(xué)依據(jù)。
　　方法:(1)熒光素酶報(bào)告基因與MTT實(shí)驗(yàn)檢測歐前胡素對NF-κB轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞存活率的影響;免疫熒光實(shí)驗(yàn)與蛋白

2、免疫印跡檢測歐前胡素對p65及COX-2、cyclin D1、MMP-9、VEGF、IL-6、Bcl-XL、 p-IKKα/β、p-Akt、caspases-8、PARP蛋白表達(dá)的影響;RT-qPCR與ELISA實(shí)驗(yàn)檢測了歐前胡素對mRNA Bcl-XL、mRNA IL-6、mRNA TNF-α及細(xì)胞分泌物MMP-9、IL-6的影響;凋亡和ROS實(shí)驗(yàn)檢測了歐前胡素對細(xì)胞凋亡及細(xì)胞內(nèi)ROS的影響;(2)熒光素酶報(bào)告基因與MTT實(shí)驗(yàn)檢測尾葉

3、香茶菜丙素對HIF-1α轉(zhuǎn)錄活性及細(xì)胞存活率的影響;蛋白免疫印跡與免疫熒光實(shí)驗(yàn)檢測尾葉香茶菜丙素對腫瘤細(xì)胞中HIF-1α蛋白表達(dá)的影響;RT-PCR與ELISA實(shí)驗(yàn)檢測了尾葉香茶菜丙素對HIF-1α mRNA、VEGFmRNA、EPO mRNA以及細(xì)胞上清液中VEGF的影響;流式細(xì)胞術(shù)及裸鼠體內(nèi)移植瘤實(shí)驗(yàn)分別檢測了尾葉香茶菜丙素對細(xì)胞周期及體內(nèi)移植瘤的影響。
　　結(jié)果:(1)歐前胡素劑量依賴性的抑制了TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB下游

4、靶基因的表達(dá);歐前胡素促進(jìn)TNF-α誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡;歐前胡素抑制了HeLa細(xì)胞中PI3K/Akt的活化，IKKα/β的磷酸化，IκBα的降解以及P65的核轉(zhuǎn)移，并呈劑量依賴關(guān)系抑制活性氧ROS的含量。(2)尾葉香茶菜丙素對缺氧誘導(dǎo)條件下不同腫瘤細(xì)胞中HIF-1α呈劑量依賴性抑制并抑制HIF-1α蛋白的合成，對其降解和HIF-1αmRNA的表達(dá)并無影響;尾葉香茶菜丙素可有效抑制HIF-1α靶基因VEGF、EPO及GLUT1的表達(dá);尾葉香茶