萊菔素抗腫瘤活性評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究.pdf

1、目的：許多流行病學(xué)及體外體內(nèi)腫瘤相關(guān)研究已經(jīng)證實(shí)，十字花科植物中的天然代謝產(chǎn)物-異硫氰酸酯(isothiocyanates，ITCs)，尤其是萊菔硫烷(sulforaphane，SFA)，既能在腫瘤起始前預(yù)防腫瘤發(fā)生又能在腫瘤發(fā)生發(fā)展階段殺傷腫瘤。我們的前期研究成功從萊菔子中分離純化出一種萊菔硫烷的結(jié)構(gòu)類似物-萊菔素(sulforaphene，SFE)，并推測(cè)其具有和萊菔硫烷相似的抗癌活性。本研究選擇在中國人群中高發(fā)的食管鱗癌和乳腺癌為

2、研究對(duì)象，體外體內(nèi)試驗(yàn)評(píng)價(jià)萊菔素的抗腫瘤活性，并試圖揭示萊菔素在這兩種腫瘤中的抗腫瘤作用機(jī)制。
　　方法：MTT法體外評(píng)價(jià)萊菔素的抗腫瘤活性，流式細(xì)胞術(shù)觀察萊菔素對(duì)細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡的影響。Western Blot法分析DNA損傷和細(xì)胞周期相關(guān)標(biāo)志物蛋白水平和磷酸化變化，利用基因芯片技術(shù)進(jìn)行表達(dá)譜分析腫瘤細(xì)胞在萊菔素給藥前后基因表達(dá)水平的改變，熒光定量PCR驗(yàn)證芯片結(jié)果。構(gòu)建基因過表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞研究基因表達(dá)對(duì)腫瘤的影響。

3、裸鼠成瘤試驗(yàn)體內(nèi)評(píng)價(jià)萊菔素的抗乳腺癌活性。
　　結(jié)果：萊菔素體外能夠有效抑制食管鱗癌和乳腺癌細(xì)胞生長，48小時(shí)抑制食管鱗癌和乳腺癌細(xì)胞的IC50均在25μM以內(nèi)，與萊菔硫烷比較二者IC50無顯著差別。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，萊菔素可將人食管鱗癌細(xì)胞KYSE150和KYSE30阻滯在G2/M期，這可能與萊菔素誘導(dǎo)DNA損傷尤其是雙鏈損傷(DSB)有關(guān)，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)活性氧簇物質(zhì)(ROS)的積累也部分貢獻(xiàn)了萊菔素對(duì)KYSE細(xì)胞的抑制作用

4、。乳腺癌裸鼠成瘤試驗(yàn)進(jìn)一步顯示萊菔素能夠有效抑制乳腺癌移植瘤的生長，且表現(xiàn)出很小的毒性。基因表達(dá)譜分析發(fā)現(xiàn)EGR1基因在乳腺癌細(xì)胞中被萊菔素上調(diào)表達(dá)18倍，而且熒光定量PCR結(jié)果與芯片結(jié)果基本一致。在乳腺癌細(xì)胞內(nèi)上調(diào)EGR1基因表達(dá)能夠抑制乳腺癌細(xì)胞的生長。利用臨床數(shù)據(jù)進(jìn)行生存曲線分析顯示EGR1高表達(dá)的乳腺癌病人生存期相對(duì)更長，預(yù)后更好(HR=0.76，p=3.5e×10-6)。結(jié)果提示EGR1基因應(yīng)該是萊菔素抑制乳腺癌細(xì)胞的一個(gè)重要