鉑-唑來膦酸配合物的抗腫瘤活性及作用機制研究.pdf

1、目的:探討鉑-唑來膦酸配合物{[Pt(en)]2ZL}對多種腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤活性，并初步研究該化合物抑制人胃癌細(xì)胞SGC7901增殖的可能機制。
　　方法:運用傳統(tǒng)MTT方法來測定{[Pt(en)]2ZL}所影響的多種腫瘤細(xì)胞存活率，以及后期加入FOH時的腫瘤細(xì)胞存活率變化。平板克隆實驗用于檢測{[Pt(en)]2ZL}對人胃癌細(xì)胞SGC7901增殖情況的影響。細(xì)胞衰老半乳糖苷酶染色與免疫熒光染色分別用來觀察此配合物引起的SGC7

2、901衰老及微管動態(tài)平衡方面的改變。選用適當(dāng)?shù)臒晒馊旧?PI單染、Hochest33342/PI熒光雙染、JC-1單染、TUNEL實驗、Annexin V/PI雙染)進行熒光顯微鏡觀察及流式細(xì)胞儀定量分析{[Pt(en)]2ZL}及法尼醇(FOH)的加入對SGC7901細(xì)胞周期和凋亡的影響。AO熒光染色可用于觀察此配合物引起的細(xì)胞自噬相關(guān)形態(tài)學(xué)變化。Western blot可用于半定量觀測{[Pt(en)]2ZL}所引起的細(xì)胞周期相關(guān)蛋

3、白(p53、p21、Cyclin D1，Cyclin E和CDK2)，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，Bax，caspase3，PARP及survivin)，細(xì)胞自噬相關(guān)蛋白LC3以及小G蛋白家族相關(guān)蛋白(Ras和RhoA)的表達水平的變化。
　　結(jié)果:{[Pt(en)]2ZL}對多種腫瘤細(xì)胞具有良好的抗腫瘤活性(如:對胃癌細(xì)胞SGC7901和MGC803的IC50值分別為25.15±0.75和38.52±3.00μM)，且目前對人

4、胃癌細(xì)胞SGC7901最為顯著，并觀察到胃癌細(xì)胞在藥物作用后會出現(xiàn)衰老及微管動態(tài)平衡形態(tài)及功能方面的改變，并進一步檢測到其細(xì)胞周期阻滯在G1/S期(99.99％)，且細(xì)胞周期調(diào)控相關(guān)蛋白(p53、p21、Cyclin E和CDK2表達水平上調(diào)，Cyelin D1的表達水平下調(diào))的表達水平也相應(yīng)改變。與此同時，在熒光染色下SGC7901也出現(xiàn)了明顯的凋亡形態(tài)和功能變化，而Annexin V/PI雙染更能定量觀測到凋亡發(fā)生的比例(早凋和晚凋

5、的比例分別可升至20.5％和25.3％)，且細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白(Bcl-2，easpase3酶原，PARP酶原及survivin表達水平下調(diào)，Bax及剪切后PARP表達水平上調(diào))的表達水平亦發(fā)生變化。而FOH的加入，可以削弱{[Pt(en)]2ZL}引起的細(xì)胞增殖抑制（IC50值升至84.43±4.04μM）、細(xì)胞周期阻滯(G2/M期升至9.17±1.12％)和凋亡（早凋和晚凋的比例分別降至6.12±3.51％和5.36±0.53％），并

6、引起小G蛋白家族（Ras和RhoA酶原表達水平下調(diào)，非異戊烯化的Ras和RhoA表達水平上調(diào)）的表達水平的變化。另外，AO熒光染色及LC3蛋白表達水平的檢測發(fā)現(xiàn){[Pt(en)]2ZL}可引起SGC7901發(fā)生自噬相關(guān)的形態(tài)和分子水平方面的改變。
　　結(jié)論:鉑-唑來膦酸配合物{[Pt(en)]2ZL}對多種腫瘤細(xì)胞具有良好的抗腫瘤活性，尤以對人胃癌細(xì)胞SGC7901較為突出。目前的研究表明{[Pt(en)]2ZL}對人胃癌細(xì)胞SG