咖啡酸鍺抗腫瘤活性與機(jī)制研究.pdf

1、惡性腫瘤嚴(yán)重危害人類健康，宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一，居女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的50％以上，病死率居?jì)D女惡性腫瘤的首位。調(diào)查發(fā)現(xiàn)其發(fā)病率呈每年上升及年輕化趨勢。藥物治療是目前臨床治療惡性腫瘤的主要手段之一．尋找和研發(fā)高效低毒的化療藥物，是當(dāng)代化學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重要研究課題。有機(jī)鍺化合物是具有抗癌活性的金屬化合物之一，因其廣譜的抗癌作用，獨(dú)特的生理活性，極低的毒性而日益受到人們的重視。目的： 研究咖啡酸鍺對荷瘤小鼠的實(shí)驗(yàn)治療作用及

2、體外抗腫瘤活性，從細(xì)胞、亞細(xì)胞水平探討其抗腫瘤作用機(jī)制，并考察咖啡酸鍺的急性毒性，為咖啡酸鍺作為新型化療藥物的開發(fā)和應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法： 建立小鼠皮下移植瘤模型，觀察咖啡酸鍺對小鼠U14宮頸癌和小鼠H22肝癌的實(shí)驗(yàn)治療作用;以HE染色、MG-P染色和透射電鏡的方法觀察咖啡酸鍺誘導(dǎo)小鼠移植瘤細(xì)胞凋亡的作用；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測咖啡酸鍺作用后腫瘤組織的細(xì)胞凋亡率和分析細(xì)胞周期改變；采用免疫組化方法，觀察藥物作用后小鼠移植瘤組織中b

3、ax和bcl．2蛋白表達(dá)情況；采用MTT法評價(jià)咖啡酸鍺體外抑制u14和H22腫瘤細(xì)胞活性；觀察咖啡酸鍺對小鼠的急性毒性。 結(jié)果： l、對荷瘤小鼠的抗腫瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，咖啡酸鍺對宮頸癌u14有很好的實(shí)驗(yàn)治療作用：連續(xù)給藥10天后，0.5m/kg、1 mg/kg和2mg，kg劑量組的抑瘤率分別為38.5％、47.2％和64.0％，瘤重與陰性對照組比較均有顯著性差異(P<0.01)。咖啡酸鍺對肝癌H22亦有顯著的體內(nèi)抗腫瘤作用

4、，0.5 mg/k、1 mg/kg和2 mg/kg劑量組的抑瘤率分別為37.4％、47.2％和64.0％，瘤重均明顯小于陰性對照組(P<0.01)。MTT法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：咖啡酸鍺對體外培養(yǎng)的U14細(xì)胞和H22細(xì)胞增殖均有一定程度的抑制作用，對48小時(shí)后的U14細(xì)胞的ICso值為48.57μg/ml2、咖啡酸鍺對U14荷瘤小鼠、H22荷瘤小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響，與陰性對照組比較，均無明顯差異(P>0.05)，體重?zé)o明顯下降(P>0.

5、05)。相對于化療藥物環(huán)磷酰胺對機(jī)體出現(xiàn)的嚴(yán)重免疫抑制作用，咖啡酸鍺體現(xiàn)出一定優(yōu)勢。 3、HE染色、MG-P染色組織病理學(xué)及電鏡觀察可見，咖啡酸鍺組出現(xiàn)較多的凋亡細(xì)胞(P<0.05)，可見細(xì)胞皺縮變小，胞漿致密，核固縮，染色質(zhì)濃集、邊聚、胞質(zhì)空泡化等細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)特征。 4、流式細(xì)胞術(shù)檢測結(jié)果表明，咖啡酸鍺能誘導(dǎo)U14腫瘤細(xì)胞凋亡，在GO～GI前出現(xiàn)一個(gè)明顯的凋亡峰，細(xì)胞周期被阻滯在s期。 5、免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，咖

6、啡酸鍺誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是通過影響促凋亡蛋白和抗凋亡蛋白的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的?？Х人徭N使U14和H22細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，bax蛋白表達(dá)上調(diào)。 6、急性毒性實(shí)驗(yàn)表明，咖啡酸鍺對小鼠無明顯急性毒性，最大耐受量為8g/kg。 結(jié)論： 咖啡酸鍺在體內(nèi)外均能有效抑制小鼠U14宮頸癌、小鼠H22肝癌的生長，且無免疫抑制作用，無明顯急性毒性。咖啡酸鍺可明顯上調(diào)U14和H22細(xì)胞中bax蛋白的表達(dá)，下調(diào)bcl-2蛋白的表達(dá)，進(jìn)而促