蓽拔酰胺衍生物抗腫瘤活性評價及抗SK-N-SH細胞作用機制研究.pdf

1、蓽拔酰胺最早發(fā)現(xiàn)于胡椒科植物蓽拔的根部，據(jù)文獻報道它能夠提高腫瘤細胞內(nèi)的活性氧水平，進而殺傷腫瘤細胞。因為蓽拔酰胺對正常細胞的損傷作用小，受到藥物研究人員的關注。但是由于蓽拔酰胺具有溶解性低，作用靶點不明的缺點，因此本課題組合成了一系列的蓽拔酰胺衍生物并對衍生物進行活性評價及其作用機制的探討，以期改善不足，獲得活性更好，作用機制明確的抗腫瘤化合物。本研究論文的主要內(nèi)容如下：
　　選用MTT比色法對合成的51個蓽拔酰胺衍生物進行體外

2、抗腫瘤活性篩選，涉及的腫瘤細胞株有：SGC7901，MGC803，EJ，EC109和SK-N-SH，首先對所有化合物進行粗篩，將得到的活性較好化合物進行3次細篩。研究結果表明對5種腫瘤細胞48 h IC50小于1μM的衍生物有2個，1~5μM的有11個，5~20μM的有3個。在所有衍生物中PL-C21對SK-N-SH的活性最突出，48 h IC50是280 nM，是蓽拔酰胺抗SK-N-SH活性的10倍。
　　對篩選最優(yōu)化合物PL-

3、C21進行了SK-N-SH抗癌機制研究。采用染色法觀察凋亡小體，流式細胞術檢測細胞周期、凋亡、活性氧和線粒體膜電位水平，蛋白質(zhì)免疫印跡法檢測與活性氧有關信號通路的蛋白，探索該化合物抗SK-N-SH細胞的作用機制。染色實驗觀察到早期凋亡細胞核皺縮，有的呈新月形緊挨著核膜；晚期凋亡細胞核破裂，呈大小不等圓形凋亡小體。流式細胞術檢測 PL-C21將SK-N-SH細胞阻滯于G2/M期；PL-C21誘導SK-N-SH細胞凋亡，并且相同的時間下凋亡

4、率隨著PL-C21濃度的增加而增加；PL-C21能夠升高SK-N-SH細胞內(nèi)活性氧水平和降低線粒體膜電位。當加入活性氧抑制劑氮乙酰谷胱甘肽（NAC）后，能夠逆轉(zhuǎn)PL-C21引起的腫瘤細胞形態(tài)，周期，凋亡，活性氧和線粒體膜電位的變化。蛋白質(zhì)免疫印跡實驗檢測PL-C21對SK-N-SH細胞信號通路的影響。PL-C21殺傷SK-N-SH細胞在相同的時間隨著藥物濃度的增加促凋亡蛋白 Bax、Bad表達量增加；活化后的Caspase3，Caspa

5、se9蛋白表達量增加；Caspase3的底物Active-PAPR蛋白表達量增加。因為ROS的產(chǎn)生與p38 MAPK有關。因此實驗中加入p38 MAPK信號通路的特異性抑制劑SB62005后，用流式細胞術檢測細胞內(nèi)ROS水平及p38蛋白磷酸化水平被部分逆轉(zhuǎn)。所以，PL-C21殺傷腫瘤細胞可能與激活了MAPK通路有關。
　　綜上所述，通過活性篩選得到的最優(yōu)化合物PL-C21具有誘導SK-N-SH細胞凋亡，阻滯細胞周期，引起活性氧升高