莫諾苷對SK-N-SH細胞氧化損傷的保護作用及機制研究.pdf

1、目的：建立SK-N-SH細胞的過氧化氫（hydrogen peroxide，H2O2）的氧化損傷模型，初步探討莫諾苷對細胞氧化損傷的保護作用。
　　方法：
　　1.采用對數生長期的人神經母細胞瘤（SK-N-SH）細胞，給予不同濃度的莫諾苷（1μM，10μM和100μM）預處理24h，加入H2O2（200-400μM）作用24h以誘導細胞損傷。
　　2.在倒置相差顯微鏡下觀察各組SK-N-SH細胞的生長和形態(tài)學變化。

2、r>　　3.用MTT法檢測細胞存活率；乳酸脫氫酶（LDH）細胞毒性檢測試劑盒檢測細胞內LDH的釋放量；脂質氧化（MDA）檢測試劑盒檢測細胞脂質氧化水平；超氧化物歧化酶（SOD）測定試劑盒檢測細胞內SOD的含量。
　　4.以活性氧（ROS）檢測試劑盒檢測細胞內ROS的生成；超氧化物陰離子熒光探針（Dihydroethidium）檢測細胞內超氧化物陰離子的水平。
　　5.應用線粒體膜電位檢測試劑盒（JC-1）檢測線粒體膜電位（△

3、Ψm）的變化；采用分光光度法檢測細胞內Caspase-3活性。
　　6.通過流式細胞術（FCM）、Hoechst染色分析細胞凋亡。
　　7.利用Western blot檢測細胞凋亡相關蛋白的表達變化。
　　8.利用RT-PCR檢測凋亡相關基因的表達。
　　結果：
　　1.MTT細胞活力檢測結果顯示，H2O2可降低SK-N-SH細胞活力，并呈現出劑量和時間依賴的關系。經過H2O2（200μM）處理24h后，細

4、胞活力較對照組顯著降低，而莫諾苷能明顯抑制H2O2導致的SK-N-SH細胞活力下降。
　　2.形態(tài)學結果顯示，經過H2O2（200μM）處理24h后，SK-N-SH細胞可出現突起消失、胞體腫脹圓縮、部分細胞發(fā)生聚集并破裂成細胞碎片等顯著的形態(tài)學變化；而莫諾苷的預處理能夠減輕這一損傷變化。
　　3.LDH細胞毒性檢測結果表明，莫諾苷可減少胞內酶LDH的釋放。
　　4.流式細胞術和Hoechst染色的結果表明，莫諾苷可顯著

5、抑制H2O2誘導的SK-N-SH細胞凋亡。
　　5.DCFH-DA和Dihydroethidium熒光探針檢測結果顯示，莫諾苷可有效抑制H2O2誘導的細胞內ROS蓄積。
　　6.脂質氧化檢測結果表明，莫諾苷可抑制細胞內的脂質發(fā)生過氧化；SOD的檢測表明，莫諾苷可顯著抑制H2O2誘導的SOD含量的下降。
　　7.JC-1熒光探針和分光光度法的結果顯示，莫諾苷可顯著抑制H2O2誘導的SK-N-SH細胞線粒體膜電位的下降以及