網(wǎng)格蛋白依賴型內(nèi)吞途徑在EV71入侵人SK-N-SH細(xì)胞作用的研究.pdf

1、目的：
　　在前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上利用藥物阻斷劑、免疫熒光染色、TaqManQPCR、激光共聚焦等技術(shù)進(jìn)一步研究腸道病毒71型入侵人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SK-N-SH細(xì)胞的機(jī)制，尤其是網(wǎng)格蛋白依賴型內(nèi)吞途徑在EV71進(jìn)入人SK-N-SH細(xì)胞中作用。
　　材料和方法：
　　EV71病毒和所有的細(xì)胞株來源于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬兒童醫(yī)院兒研所組織庫，均為前期實(shí)驗(yàn)研究所保存。實(shí)驗(yàn)分組一：
　?。?）氯丙嗪(CPZ）處理組（10、20 uM

2、 CPZ）。
　　（2）制霉菌素（NT）處理組（10、20 ug/ml NT）。
　?。?）未處理組（無任何藥物）。每組含3個(gè)平行孔，并重復(fù)3次。SK-N-SH細(xì)胞按上述實(shí)驗(yàn)分組給予不同的處理?xiàng)l件后，再進(jìn)行EV71感染實(shí)驗(yàn)，最后利用 TaqManQPCR和免疫熒光染色法檢測(cè)靶細(xì)胞中EV71 mRNA和 VP1蛋白表達(dá)水平的變化。
　　實(shí)驗(yàn)分組二：
　?。?）CPZ處理組（10、20 uM CPZ）。
　　（

3、2）未處理組（無任何藥物）。
　　每組含3個(gè)平行孔，并重復(fù)3次。SK-N-SH細(xì)胞按上述實(shí)驗(yàn)分組給予不同的處理?xiàng)l件后，再進(jìn)行EV71感染實(shí)驗(yàn)，最后利用激光共聚焦顯微鏡術(shù)檢測(cè)EV71與入侵途徑標(biāo)志分子共定位。
　　結(jié)果：
　　1、TaqManQPCR結(jié)果顯示CPZ能夠抑制EV71 mRNA的表達(dá)（P＜0.05），而制霉菌素對(duì)其影響無意義（P＞0.05）。
　　2、免疫熒光染色結(jié)果顯示CPZ能夠抑制EV71 VP1蛋